pcr证试题及答案

pcr证试题及答案

一、单项选择题（共30题，每题1分）（以下每题只有一个正确答案，请将正确选项的序号填在括号内）PCR技术的核心原理是基于（）A.核酸杂交反应B.核酸扩增反应C.抗原抗体特异性结合D.酶联免疫吸附反应以下哪种酶是PCR反应中必需的关键酶（）A.逆转录酶B.DNA连接酶C.Taq DNA聚合酶D.限制性内切酶实时荧光定量PCR与普通PCR相比，最显著的优势是（）A.提高扩增效率B.实现产物定量分析C.缩短反应时间D.降低引物二聚体生成核酸提取过程中，使用RNase抑制剂的主要目的是（）A.防止RNA降解B.提高DNA纯度C.促进核酸沉淀D.增强酶促反应PCR反应中，引物的退火温度通常由（）决定A.模板DNA的长度B.引物的碱基组成C.反应体系的pH值D.dNTP的浓度以下哪种因素可能导致PCR产物非特异性扩增（）A.引物浓度过高B.退火温度过高C.Mg²⁺浓度过低D.延伸时间过短核酸扩增产物的长度通常通过（）检测A.琼脂糖凝胶电泳B.紫外分光光度计C.荧光显微镜D.流式细胞仪临床基因扩增检验实验室的核心区域不包括（）第1页共8页A.试剂储存和准备区B.标本制备区C.扩增产物分析区D.仪器维修区荧光定量PCR中，Ct值（循环阈值）与起始模板量的关系是（）A.正相关B.负相关C.无关联D.呈指数关系以下哪种不是PCR反应的基本成分（）A.模板DNA B.限制性内切酶C.引物对D.dNTP混合液核酸提取时，使用蛋白酶K的主要作用是（）A.消化蛋白质杂质B.促进DNA复性C.提高核酸溶解度D.增强引物结合普通PCR反应的三个基本温度循环是（）A.94℃→72℃→55℃B.94℃→55℃→72℃C.55℃→94℃→72℃D.72℃→94℃→55℃引物设计时，G+C碱基对的比例一般建议在（）A.30%-40%B.40%-60%C.50%-70%D.60%-80%以下哪种情况可能导致假阴性结果（）A.模板DNA降解B.引物二聚体生成过多C.退火温度过低D.Mg²⁺浓度过高核酸扩增产物的特异性验证常用方法是（）A.测序分析B.密度梯度离心C.原位杂交D.限制性片段长度多态性分析临床基因扩增检验的室内质控中，阴性质控品的作用是（）A.验证试剂有效性B.监控扩增抑制C.评估仪器性能D.检测假阳性实时荧光定量PCR中，SYBR GreenI染料的结合特性是（）第2页共8页A.仅结合双链DNA B.仅结合单链DNA C.结合所有核酸D.结合引物二聚体核酸提取过程中，使用离心吸附柱时，洗涤液的主要作用是（）A.溶解核酸B.去除蛋白质杂质C.调节pH值D.促进核酸沉淀以下哪种不是PCR常见的假阳性来源（）A.环境污染B.试剂污染C.模板DNA降解D.操作区未严格分区多重PCR的主要应用是（）A.提高扩增效率B.检测多种靶序列C.降低反应成本D.缩短反应时间核酸提取时，使用酚-氯仿的目的是（）A.沉淀核酸B.溶解蛋白质C.去除脂类杂质D.调节离子浓度普通PCR的退火温度一般比引物的解链温度（Tm值）低（）A.1-2℃B.3-5℃C.6-8℃D.9-10℃临床基因扩增检验实验室分区时，应严格控制人流和物流的方向是（）A.试剂区→标本区→扩增区→产物分析区B.产物分析区→扩增区→标本区→试剂区C.标本区→试剂区→扩增区→产物分析区D.试剂区→扩增区→标本区→产物分析区核酸扩增反应中，dNTP的终浓度一般建议为（）A.50-100μmol/L B.200-500μmol/L C.1-5mmol/L D.10-20mmol/L以下哪种方法可用于评估PCR反应的灵敏度（）A.终点稀释法B.琼脂糖凝胶电泳C.实时荧光定量D.原位PCR核酸提取时，使用DNase I处理的目的是（）第3页共8页A.去除RNA污染B.去除DNA污染C.增强核酸稳定性D.促进引物结合普通PCR的延伸温度通常设定在（）A.70-75℃B.72-75℃C.75-80℃D.68-70℃引物二聚体的形成主要影响（）A.扩增效率B.产物特异性C.反应时间D.酶活性临床基因扩增检验的室间质评中，要求靶序列浓度的变异系数（CV）一般不超过（）A.10%B.15%C.20%D.25%核酸扩增产物分析时，熔解曲线分析的主要目的是（）A.确定产物大小B.验证产物特异性C.定量分析模板D.检测酶活性

二、多项选择题（共20题，每题2分，多选、少选、错选均不得分）以下属于PCR反应关键影响因素的有（）A.引物设计B.Mg²⁺浓度C.退火温度D.循环次数E.模板量实时荧光定量PCR常用的荧光化学物质有（）A.SYBR GreenI B.TaqMan探针C.分子信标D.荧光淬灭剂E.溴化乙锭核酸提取的常见方法包括（）A.酚-氯仿法B.硅胶膜吸附法C.磁珠法D.柱提法E.密度梯度离心法临床基因扩增检验实验室分区的原则有（）A.严格单向流程B.防止交叉污染C.明确功能分区D.控制空气流向E.仪器设备专用可能导致PCR假阴性的原因有（）第4页共8页A.模板DNA降解B.引物与模板结合效率低C.酶失活D.退火温度过高E.反应体积过大引物设计的基本原则包括（）A.引物长度18-25bp B.引物内无回文结构C.引物3端G+C含量高D.引物之间无互补序列E.Tm值差异小于2℃核酸扩增产物常见的质量问题有（）A.非特异性条带B.引物二聚体C.引物降解D.产物降解E.条带模糊临床基因扩增检验的质量控制措施包括（）A.室内质控B.室间质评C.仪器日常维护D.试剂验证E.人员操作培训多重PCR的优势有（）A.一次反应检测多种靶标B.节省样本量C.降低成本D.提高检测效率E.适用于所有标本类型核酸杂交技术在PCR产物验证中的应用有（）A.斑点杂交B.Southern blotC.原位杂交D.荧光原位杂交E.核酸序列依赖性扩增影响核酸提取效率的因素有（）A.样本类型B.裂解液配方C.离心速度和时间D.洗涤液用量E.吸附柱质量普通PCR与实时荧光定量PCR的区别有（）A.产物检测方式B.能否定量C.反应温度循环D.引物设计E.酶的种类临床基因扩增检验的主要应用领域包括（）第5页共8页A.传染病诊断B.肿瘤标志物检测C.遗传病筛查D.病原体载量监测E.药物靶点分析核酸扩增反应中，dNTP的作用有（）A.提供能量B.作为底物C.维持pH稳定D.参与链延伸E.标记产物可能导致PCR假阳性的原因有（）A.气溶胶污染B.试剂开封后未及时使用C.操作区未严格分区D.阳性对照污染E.退火温度过低核酸提取时，去除蛋白质杂质的常用方法有（）A.蛋白酶K消化B.酚-氯仿抽提C.超速离心D.硅藻土吸附E.核酸酶处理实时荧光定量PCR的定量方法包括（）A.标准曲线法B.相对定量法C.终点法D.熔解曲线法E.内标法临床基因扩增检验实验室的核心设备有（）A.生物安全柜B.高速离心机C.实时荧光定量PCR仪D.核酸提取仪E.凝胶成像系统引物设计时，避免引物二聚体的措施有（）A.控制引物浓度B.避免引物3端互补C.调整退火温度D.优化引物长度E.使用引物二聚体消除剂核酸扩增产物的测序验证中，常用的测序方法有（）A.Sanger测序B.二代测序C.三代测序D.焦磷酸测序E.连接酶测序

三、判断题（共20题，每题1分，正确的打“√”，错误的打“×”）PCR反应中，退火温度越高，引物与模板的非特异性结合越强（）第6页共8页实时荧光定量PCR只能检测DNA靶序列，不能检测RNA（）核酸提取时，硅胶膜吸附DNA的效率受离子浓度影响（）临床基因扩增检验实验室的试剂储存和准备区可以与标本制备区共用（）普通PCR的产物长度通常在100-1000bp之间（）引物的Tm值计算公式为Tm=2A+T+4G+C，该公式适用于所有引物（）阴性对照的作用是验证实验过程中是否存在污染（）多重PCR中，各引物对的退火温度必须一致（）酚-氯仿法提取核酸时，离心后上层为水相，下层为有机相（）实时荧光定量PCR的Ct值越小，说明起始模板量越多（）核酸扩增反应中，Mg²⁺浓度过高会导致非特异性扩增（）临床基因扩增检验的室内质控品应与实际标本处理（）Taq DNA聚合酶具有5→3外切酶活性（）引物设计时，3端的单个碱基必须与模板完全互补（）核酸提取时，RNase A的作用是去除RNA污染（）普通PCR的循环次数一般为25-35次，循环次数过多易导致非特异性产物（）熔解曲线分析可用于区分特异性产物和引物二聚体（）临床基因扩增检验实验室的空气流向应从试剂区→标本区→扩增区→产物分析区（）dNTP的浓度过高会抑制DNA聚合酶活性（）核酸序列依赖性扩增（NASBA）是一种依赖RNA的恒温扩增技术（）

四、简答题（共2题，每题5分）第7页共8页简述PCR反应的基本原理及主要步骤临床基因扩增检验实验室的分区原则及各区域的主要功能是什么？参考答案

一、单项选择题B

2.C

3.B

4.A

5.B

6.A

7.A

8.D

9.B

10.BA

12.B

13.B

14.A

15.A

16.D

17.A

18.B

19.C

20.BC

22.B

23.A

24.C

25.A

26.B

27.B

28.B

29.C

30.B

二、多项选择题ABCDE

2.ABC

3.ABCD

4.ABCDE

5.ABCD

6.ABDE

7.ABDE第8页共8页。