《光学显微镜制样》课件

光学显微镜制样光学显微镜样品制备全流程与核心要点，覆盖生物与材料领域，强调操作细节本课程通过案例结合，助力您实现高质量显微成像课程导引制样的关键意义样品制备是显微观察的基础环节，直接决定了最终成像质量精细的制样工艺能够呈现样品真实结构，避免伪影干扰，确保数据可靠性67%成像质量由制样质量决定，远高于仪器因素影响33%其他因素包括仪器质量、操作技术和环境条件光学显微镜简介基本结构组成成像原理目镜放大物镜形成的实像，通常×放大光学显微镜利用可见光通过样品，经物镜和目镜系统放大后形成像样•10品需要足够薄且透光，以便光线通过并形成清晰图像物镜数值孔径决物镜主要放大部件，分×、×、×、×等•41040100定了分辨率上限，而样品质量则影响实际可达分辨率载物台放置载玻片，可精确移动定位•光源系统提供稳定照明•调焦系统粗调和微调旋钮•制样对显微镜成像的影响载玻片处理与背景清洁度1载玻片表面的指纹、灰尘或清洁剂残留会形成干扰背景，影响图像对比度高质量成像要求载玻片绝对清洁，无任何污染样品厚度与透明度2过厚的样品会阻碍光线透过，导致图像模糊；而厚度不均则造成部分区域失焦理想切片厚度和适当的透明处理是获得高分辨率的关键5-10μm染色质量与对比度3适当的染色能增强组织结构对比度，突出目标特征染色不均或过度会掩盖细节，影响形态学判断准确性样品制备常见应用领域生物医学领域材料分析领域组织切片病理诊断、组织学研究金属材料晶粒结构、相组成分析••细胞涂片血液学检查、细胞学诊断聚合物微观结构、分散性研究••微生物制片细菌培养鉴定、真菌观察微粉体粒度分析、形貌表征••植物切片植物解剖学、植物病理学陶瓷材料气孔分布、相界面研究••胚胎学发育研究、畸形学分析复合材料界面结合、缺陷分析••制样前的准备工作工具准备样品选择准备无菌洁净的制样工具，包括镊子、剪刀、解剖刀、载玻片等工具/选取具有代表性的样品部位，避开变性、坏死或污染区域需考虑组织应专用并定期维护，防止交叉污染/材料的多样性，确保样品能反映整体特征试剂配制环境消毒按照标准方案配制固定液、染色液等，确保值适宜，浓度准确使用pH清洁实验台面，使用酒精或专用消毒剂擦拭必要时开启紫外灯照前检查试剂有效期，避免变质试剂导致实验失败75%射分钟进行空气消毒，特别是处理无菌样品时30主要制样材料与工具基础材料制样试剂载玻片标准规格×，厚度固定剂多聚甲醛、福尔马林、无水乙醇•7626mm1-

1.2mm•4%盖玻片常用×或×，厚度染色剂苏木精、伊红、姬姆萨染液等•1818mm2222mm

0.13-

0.16mm•标签防水耐化学试剂，用于样品编号脱水剂梯度浓度乙醇、丙酮••存储盒防尘防潮，利于长期保存透明剂二甲苯、甲苯、丁香油••封固剂中性树脂、火棉胶•主要工具辅助设备切片机石蜡切片机、冷冻切片机超声波清洗器清洁载玻片••包埋盒用于石蜡包埋过程烘箱烘干与石蜡渗透••镊子不同规格，用于取放样品恒温水浴锅石蜡切片展平••解剖工具剪刀、手术刀、解剖针磨片机材料样品研磨打磨••载玻片与盖玻片处理洗洁精清洗新载玻片浸泡在洗洁精溶液中分钟，去除油脂和工业污染物洗洁2%30精具有良好的乳化作用，能有效去除载玻片表面的脂溶性污染超声波清洗将载玻片放入超声波清洗器中，使用纯净水超声清洗分钟超声波能15有效去除微小颗粒和附着污染物，达到微观清洁效果酒精脱水依次使用、、乙醇浸泡各分钟，确保彻底脱水脱水过70%95%100%5程能去除水溶性杂质，并加速后续烘干过程烘干包被/℃烘箱干燥小时后，可选用或多聚赖氨酸进行包被处理，提高601APES组织切片附着力包被处理对于特殊染色和长期保存的切片尤为重要样品收集与初步处理生物样品收集材料样品处理新鲜样本应立即进行固定，避免自溶金属样品需标记方向，确定观察面••记录采集时间、部位、状态等信息粉末样品应防止团聚，保持分散状态••控制样品大小，一般不超过聚合物避免受热变形，必要时冷却处理•1cm³•避免机械挤压，保持组织完整性多相材料需保持界面完整，避免分离••使用生理盐水清洗，去除血液等杂质记录材料来源、批次等关键信息••初步处理的质量直接影响后续制样效果对于特殊样品，可采用预固定或表面活性剂处理，提高后续工艺的可操作性化学固定方法多聚甲醛固定14%最常用的固定剂，能保持细胞结构完整性配制时需调节至（磷酸缓冲pH

7.4液），固定时间通常为分钟，视组织厚度而定适用于免疫组织化学和10-30一般形态学观察乙醇固定2乙醇用于细胞涂片和组织固定，能保存核酸和糖原固定快速（75%-95%5-分钟），但可能导致组织收缩和蛋白质变性特别适合血液涂片和细胞学检15查福尔马林固定3中性福尔马林是病理组织的标准固定剂穿透性好，固定时间通常为10%6-24小时，取决于组织大小能保存组织长期不变，但可能导致部分抗原性丧失固定条件应根据样品特性和后续分析需求调整过度固定会导致组织变硬难以切片，而固定不足则会使组织内部自溶，影响观察效果物理与冷冻固定空气干燥法冷冻固定法最简单的物理固定方法，适用于血液、体液等薄层样品涂布后自然晾利用超低温瞬间固定样品，保持生物活性常用液氮°进行快-196C干或使用风扇吹风机加速干燥干燥过程中避免灰尘污染，保持环境清速冷冻，样品需控制在以下厚度确保均匀冻结/3mm洁优点保存酶活性，适合组织化学和免疫荧光优点操作简便，保存核酸完整性缺点易形成冰晶伪影，需专业设备支持缺点可能导致细胞形态改变，细胞质细节损失冷冻固定后的样品需要低温保存，避免反复冻融导致组织结构破坏用于酶组织化学的样品最好采用冷冻固定，而非化学固定方法脱水处理初始洗涤固定后的样品用缓冲液洗涤次，每次分钟，去除固定剂残留充分洗涤能减35少固定剂对后续染色的干扰，提高染色质量梯度脱水依次使用、、、、、乙醇，每级浓度浸泡分钟30%50%70%80%95%100%10梯度递增避免组织剧烈收缩，保持形态完整脱水确认乙醇脱水次，确保彻底脱水脱水不充分会影响后续透明和包埋效果，100%2导致样品无法切片或形成气泡记录与转移记录每步操作时间，确保流程可追溯根据样品厚度和硬度，可适当调整脱水时间，避免过度脱水导致组织变脆对于不同类型的样品，脱水方案需要调整海绵状组织需延长脱水时间；高脂肪样品可使用氯仿替代部分乙醇脱水；骨骼等硬组织则需搭配脱钙处理透明处理透明处理原理操作要点透明处理的目的是替换组织中的脱水剂，使组织变得透明，同时与包埋使用二甲苯进行透明处理时，需在通风橱中操作，避免吸入

1.剂相容这一步骤是连接脱水与包埋的桥梁，对最终切片质量至关重要透明时间控制在分钟，视组织大小调整

2.10-20观察组织变透明（半透明状态）即可，过度透明会使组织变脆

3.主要透明剂若组织出现白斑，表明脱水不充分，需重新脱水

4.对于材料样品，透明处理主要针对聚合物等有机材料

5.二甲苯最常用，透明效果好，但刺激性强•金属样品通常不需要透明处理，直接进行包埋或制片

6.甲苯作用类似二甲苯，毒性略低•丁香油温和透明剂，适合娇嫩组织•苯甲醚透明快速，对组织损伤小•包埋基础石蜡包埋最常用的生物组织包埋方法，熔点°，易于切片56-58C优点操作简便，成本低，适合大多数软组织•缺点不适合硬组织，最薄切片限制在•3-5μm应用常规组织学检查，病理诊断•树脂包埋使用环氧树脂、甲基丙烯酸树脂等聚合物包埋样品优点硬度适中，可切极薄切片，保持细微结构•

0.5-2μm缺点操作复杂，成本高，渗透时间长•应用电镜样品制备，硬组织研究，特殊染色•冷冻包埋使用等低温切片包埋剂，不经固定直接冷冻切片OCT优点保存酶活性，避免化学固定对抗原的破坏•缺点需专用设备，组织形态保存相对较差•应用免疫组织化学，酶组织化学，脂肪染色•石蜡包埋具体步骤透明后预浸将透明后的组织放入二甲苯石蜡混合液中，°预浸分钟，促进石蜡渗透这1:1-37C30一步骤是透明剂向石蜡过渡的缓冲，减少组织应激损伤石蜡浸透将组织转入°熔融纯石蜡中，浸泡小时大型组织可能需要更换次56-58C1-22-3新鲜石蜡，确保充分渗透石蜡温度不宜超过°，以免组织过度收缩60C包埋取向使用金属包埋盒，倒入少量熔融石蜡，趁热放入组织，调整到所需切面朝下正确的取向对后续切片至关重要，应根据观察需求确定切面方向冷却成型石蜡表面凝固后，将包埋盒放入冰水中快速冷却冷却后的石蜡块需放置过夜，使内部充分固化完全冷却的石蜡块可在°冰箱中长期保存-20C树脂包埋简要工艺环氧树脂包埋流程特殊应用条件适用材料透明后的样品转入环氧树脂丙酮混合液，°浸泡小时

1.1:1-4C2转入环氧树脂丙酮混合液，室温浸泡小时

2.2:1-2骨骼、牙齿等硬组织（需先脱钙）•转入纯环氧树脂，°渗透过夜

3.37C角质化组织（皮肤、指甲等）•将样品置于树脂模具中，调整位置

4.电镜超薄切片样品•°烘箱聚合小时

5.60C24-48半导体、聚合物等材料学样品•脱模，修整树脂块，准备切片

6.注意事项树脂有毒，操作需戴手套，避免皮肤接触•固化温度控制精确，影响树脂硬度•渗透不充分会导致切片断裂或褶皱•切片操作切片机原理与类型1切片机利用精密刀片以固定厚度切割样品块常见类型包括旋转式切片机适用于石蜡包埋样品，最常用•滑走式切片机适用于较硬样品，切片更均匀•冷冻切片机配备冷冻台，用于未包埋鲜冻样品•超薄切片机用于树脂包埋样品，可切纳米级厚度•切片厚度控制2不同应用要求不同厚度的切片常规组织学，兼顾细节和强度•5-10μm细胞学研究，观察细胞结构•3-5μm三维重建，保证连续性•2-3μm特殊染色，提供足够染色面积•10-15μm材料学研究可达，观察微观结构•1-2μm切片技巧要点3高质量切片需注意以下方面切片前将石蜡块修整成梯形，便于连续切片•切片刀角度保持在°，刀片锋利无缺口•30-40切片速度均匀，避免断续动作•切片厚度设置后先试切，观察切片质量•连续切片应收集在同一载玻片上，保持顺序•凝胶和冷冻切片冷冻切片技术凝胶包埋切片冷冻切片是一种快速制备组织样本的方法，无需经过常规固定、脱水和凝胶包埋适用于松散组织和细胞悬液，提供支持结构便于切片包埋过程，特别适合热敏感和易变性样品常用凝胶类型操作流程琼脂糖浓度，适合一般组织•2-3%新鲜组织块用包埋剂包裹

1.OCT明胶浓度，适合软组织•5-10%置于至°冷冻台快速冻结

2.-20-30C聚丙烯酰胺用于特殊样品和电镜样品•在冷冻切片机上切取厚切片

3.8-10μm优势切片直接粘附于载玻片，室温融化

4.保持细胞和组织原始位置关系可选固定（丙酮或甲醇，°，分钟）•

5.-20C10防止松散细胞在切片过程中丢失进行后续染色或免疫组织化学反应•

6.可与常规包埋方法结合使用•涂片技术简介推拉法制作样品准备取一小滴样品约置于载玻片一端，用另一载玻片以°角接触液滴，2-3μL30-45血液涂片使用新鲜全血或抗凝血；细胞涂片可使用离心沉淀细胞或刮取细胞待液体扩散到边缘后，以稳定速度向前推动，形成均匀薄层速度控制决定了涂片EDTA样品应避免凝固，保持新鲜状态体液样本可能需要浓缩处理以增加细胞密度厚度，推得越快涂片越薄干燥与固定压片法制作涂片完成后立即风干或自然干燥，避免水分残留干燥后进行甲醇固定（分5-10取样品滴于载玻片中央，轻放盖玻片使样品均匀分布适用于脆弱细胞和粘稠样品钟）以保存细胞形态固定不足会导致细胞溶解，而过度固定则影响染色质量压力控制至关重要，过重会破坏细胞，过轻则厚度不均优质涂片应在载玻片上形成尾巴状，厚度从一端到另一端渐变，便于选择合适区域观察羽毛状边缘表明技术良好压片与分散法压片法技术要点分散法技术要点压片法主要适用于粉体、矿物和聚合物等固体材料样品，通过施加压力分散法适用于需要观察单个颗粒特征的粉末样品，通过液体介质分散颗使样品形成薄层便于观察粒减少团聚操作步骤分散介质选择清洁载玻片和盖玻片，确保无指纹和灰尘水溶性样品使用无水乙醇、甘油

1.•取少量样品（约）置于载玻片中央疏水性样品使用二甲苯、矿物油

2.1-2mg•样品周围可加滴浸油或液体石蜡高折射率需求溴萘、碘化甲烯

3.1-2•轻放盖玻片，用铅笔橡皮端轻轻按压

4.分散技巧压力应由中心向四周均匀分布

5.样品量控制在极少量，避免过浓•观察样品厚度，确保光线可透过

6.可使用超声波振荡辅助分散•悬浮液制备后立即取样，防止沉降•涂布时使用涂片器确保均匀厚度•染色原理与意义染色的基本原理染色是利用染料分子与细胞或组织成分间的物理化学相互作用，使特定结构显现颜色主要作用机制包括离子键结合带电染料与组织中相反电荷基团结合•氢键结合通过氢键与组织分子形成稳定连接•共价键结合某些染料可与组织形成共价键•疏水作用脂溶性染料与细胞膜脂质结合•染色的重要意义染色在显微技术中具有不可替代的作用增强无色透明结构的对比度，使之可见•区分不同细胞和组织结构•突出特定目标结构，便于观察分析•提供组织病理学诊断依据•实现特定物质的定性或半定量检测•染色剂选择原则选择适合的染色剂需考虑以下因素研究目的观察一般形态还是特定结构•样品性质组织类型、固定方式•染色剂特性亲水性亲脂性、酸性碱性•//染色稳定性是否需要长期保存•后续分析是否需要进行特殊检测•经典染色方案染色（苏木精伊红染色）特殊染色方法HE-染色最广泛使用的常规染色方法，能清晰显示组织基本结构PAS染色原理过碘酸希夫反应，用于显示多糖类物质-苏木精（碱性染料）染细胞核呈蓝紫色主要用途糖原、基底膜、真菌检测••伊红（酸性染料）染细胞质和细胞外基质呈粉红色染色结果阳性物质呈洋红色••染色步骤三色染色Masson苏木精染色分钟显示胶原纤维和肌肉组织

1.5-10自来水冲洗分钟（返蓝）

2.5细胞核蓝黑色•盐酸酒精分化几秒钟

3.1%细胞质红色•水洗分钟

4.10胶原纤维蓝绿色•伊红染色分钟

5.1-3银染色水洗、脱水、透明、封片

6.显示神经纤维、网状纤维等银盐沉积使目标结构呈黑色或棕色•背景通常呈黄色或浅棕色•材料样品特殊染色金属蚀刻使用特定蚀刻剂选择性溶解金属表面，显示晶界和组织结构常用蚀刻剂包括硝酸酒精（钢）、氢氟酸（铝合金）和硝酸（铜合金）蚀刻时间控制在秒，过度蚀刻会模5-30糊晶界聚合物染色使用特殊染料区分不同聚合物相如锇酸可染色不饱和聚合物，碘染液显示淀粉成分，油红显示脂肪组分染色前表面需抛光至镜面状态，以确保染色均匀O偏光增强结合偏光显微镜观察晶体和各向异性材料样品需制备极薄（）以允许光透过，1-5μm某些材料可添加荧光增强剂提高对比度不同晶体在偏光下呈现特征性彩色图案相分布显示复合材料中不同相的选择性染色如环氧树脂中的玻璃纤维可用荧光染料处理；金属陶瓷复合材料使用两步蚀刻法区分各相最终应呈现清晰的相界面和内部结构材料染色的关键是选择性和对比度，良好的染色应使不同组分或相清晰区分，便于微观结构分析和缺陷检测封片与抗脱落处理封片材料选择封片技术要点水溶性封片剂切片完全干燥后再封片，避免水分残留

1.封片剂用量适中，滴于切片中心

2.甘油明胶水溶性，可重复染色•盖玻片一侧先接触封片剂，缓慢放下

3.明胶甘油对荧光保存良好•可用镊子尖端轻轻按压排出气泡

4.水溶性树脂无毒，操作简便•多余封片剂用二甲苯擦拭干净

5.有机溶剂类封片剂干燥方式室温平放或°烘箱

6.37C中性树脂标准封片剂，透明度高•防止气泡技巧火棉胶干燥快，硬度适中•封片前预热载玻片和盖玻片•折射率适中，长期保存稳定•DPX封片剂适当稀释，减少粘度•使用真空脱泡设备处理•封片是制样的最后步骤，但同样关键优质封片应透明无气泡，厚度均匀，封片剂与样品及染料兼容，能长期保存而不褪色或变质载玻片正电荷处理正电荷处理原理常用处理方法处理组织切片尤其是冷冻切片在染色过程中易脱落，通过对载玻片表面进行APES正电荷处理，可以增强切片与玻片间的静电吸附力，大幅提高贴壁率载玻片浸入丙酮溶液分钟

1.2%APES5原理组织蛋白质在中性下呈负电性，与正电荷载玻片产生静电吸引，pH丙酮冲洗两次，每次分钟

2.5显著增强附着力蒸馏水冲洗两次

3.适用范围℃烘干过夜

4.60免疫组织化学染色多聚赖氨酸处理•原位杂交技术•聚赖氨酸溶液浸泡分钟

1.

0.1%5冷冻切片•室温晾干

2.需多次染色的连续切片•℃烘干小时

3.371密封保存，避免潮湿

4.实验表明，正电荷处理的载玻片可将组织切片的贴壁率提高至以上，尤其对于疏松结缔组织和含大量脂肪的组织效果显著商业化正电荷载玻片也95%可直接购买使用样品缺陷与修复皱褶与折叠气泡问题断裂与缺角原因切片温度过高、刀片不锋利或切片速度不均原因封片剂用量不足或封片技术不当原因组织脆硬、包埋不充分或切片压力过大修复轻度皱褶可在温水中展平；严重折叠需重新制修复小气泡可用针尖引导至边缘；大气泡需浸入二修复轻微断裂可拼接后封片；严重断裂建议重新制片甲苯重新封片片染色不均问题封片剂变质12当切片出现染色不均、过深或过浅时，可采取以下补救措施长期保存的切片可能出现封片剂变黄或开裂问题过度染色使用分化液（如盐酸酒精）短时间处理封片剂变黄拆片重新封片，使用抗氧化型封片剂•1%•染色不足拆除盖玻片后重新染色（需先用二甲苯浸泡）封片剂开裂全片浸入二甲苯软化后重新封片••局部不均检查切片厚度均匀性，必要时重新制片封片剂与染料反应更换兼容性好的封片剂••微米级样品制备技巧金属样品表面处理粉体样品分散技术机械抛光法真空分散法预磨依次使用砂纸打磨适用于纳米级粉体，能有效防止团聚

1.100#→400#→800#→1200#精磨使用金刚石研磨膏在绒布上抛光

2.

1.5μm配制极稀粉体悬浮液浓度

1.

0.01%终磨氧化铝悬浮液最终抛光

3.

0.5μm在真空条件下超声分散分钟

2.10-15超声清洗乙醇中超声分钟去除残留物

4.10滴加一滴于洁净载玻片

3.干燥压缩空气吹干或真空干燥

5.真空干燥确保颗粒均匀分布

4.化学抛光法喷雾干燥法铜合金₃乙醇混合液•FeCl+HCl+利用微型喷雾器将悬浮液均匀喷于载玻片，干燥后形成均匀分散的样品•铝合金H₃PO₄+H₂SO₄混合液层适用于需要观察原始颗粒形貌的场合控制浸泡时间一般在秒分钟•30-2微米级样品制备的关键是避免二次污染和人为伪影操作环境应选择洁净室，工具需定期清洁，并使用无尘布和无纤维脱落的擦拭材料纳米级与特殊材料处理超薄切片技术用于样品制备，可获得厚度的切片树脂包埋后使用金刚石刀超薄切片，切片需漂TEM50-100nm浮在水面上，然后用铜网捞取这种技术要求高精度切片机和熟练技术，通常与电镜室合作完成表面镀膜处理非导电样品观察前需进行镀膜处理，常用金、铂、钯等贵金属镀膜厚度控制在，过厚会5-10nm掩盖表面细节，过薄则导电性不足真空镀膜机中样品应旋转以确保均匀覆盖原子力显微镜制样样品表面平整度要求极高，通常需纳米级抛光基底选择云母、或硅片等超平滑材料样HOPG品固定使用导电胶或环氧树脂，确保在扫描过程中不发生移动或变形单分子成像技术或蛋白质等单分子观察需特殊处理常用修饰云母表面增强吸附，样品浓度极DNA APTES低级别，滴加后轻轻甩干成像前可用荧光标记或免疫金标记增强对比度ng/ml纳米级样品制备对环境要求极高，应在百级洁净室内操作，使用超纯水和高纯试剂，避免任何微小污染导致的伪影每一步操作都需精确控制，确保最终样品真实反映材料本征特性生物样品常见类型动物组织包括各类器官和组织，如肝、肾、心肌等通常需要通过灌注或浸泡固定，然后进行常规石蜡包埋或冷冻切片对于含钙组织（如骨骼），需先脱钙后再进行常规制片固定时间视组织大小调整，一般为小时12-24植物切片植物组织含有坚硬细胞壁，常需固定液（福尔马林冰醋酸酒精）固定叶片可直接进行徒手切片；茎和根部需石蜡包埋后切片染色常用番红固绿双染，区分木质部和韧皮部对于鲜活植物，可使用鲁哥氏液快速显示淀粉存在FAA---微生物样品细菌样品可采用涂片法，经甲醇固定后染色；革兰氏染色是细菌鉴定的基础方法真菌样品宜用乳酸酚棉蓝染色，显示菌丝和孢子结构微生物样品制备需严格无菌操作，防止杂菌污染活体微生物可采用悬滴法进行观察细胞样品培养细胞可直接在培养皿或玻片上固定染色；也可胰酶消化后制成细胞涂片骨髓细胞涂片需特殊推片技术；血细胞涂片则采用标准推片法细胞核染色常用姬姆萨或瑞氏染色，用于白细胞分类计数水生微生物原生动物等水生微生物可采用甲基纤维素减速法，将样品与甲基纤维素溶液混合，降低其活动速度便于观察硅藻等微藻需经酸处理去除有机质，展示硅质壳体浮游生物可用鲁哥氏液固定，长期保存并进行定量分析1%染色体样品制备需收集分裂期细胞，秋水仙素处理后低渗扩散，甲醇冰醋酸固定，滴片干燥常规显带需胰蛋白酶处理后姬姆萨染色；显带采用氢氧化钡处理和姬姆萨染色需严格控制每步时间，以获得清晰分散的染色体:3:1G C细胞培养与取样培养基准备根据细胞类型选择合适培养基，如、等，添加胎牛血清和双抗培养基需无菌操作，DMEM RPMI-164010%1%维持在之间培养过程中需定期观察细胞生长状态，避免过度融合或营养不足pH

7.2-

7.4细胞收集贴壁细胞用胰蛋白酶消化分钟，加培养基终止消化后离心分钟收集细胞悬

0.25%-EDTA3-51000rpm5浮细胞可直接离心收集收集的细胞应立即处理，避免长时间室温放置导致细胞活力下降细胞固定收集的细胞可用多聚甲醛固定分钟用于免疫荧光，或冰冷甲醇固定分钟用于细胞周期分析4%1510固定后洗涤次，每次分钟，去除固定剂残留固定条件需根据后续实验要求调整PBS35细胞涂片将固定后的细胞重悬于少量中，取滴于载玻片，自然展开或使用细胞离心机制备细胞涂片PBS20μl涂片干燥后可直接进行免疫荧光染色或染色细胞密度控制适中，避免过密或过稀Wright-Giemsa直接培养法细胞可直接在特殊处理的载玻片或培养皿中生长，达到适当密度后直接固定染色，避免了收集过程中的细胞损伤，更能保持原始形态切片常见厚度规格1超薄切片3μm微米切片是目前常规石蜡切片中最薄的规格，适用于高分辨率观察和特殊染色3适用情景细胞核细节观察、原位杂交技术•优势更清晰的核染色质结构，更好的细胞边界显示•挑战技术要求高，容易产生褶皱，染色时间需延长•实际应用肾小球基底膜观察、淋巴结细胞学分析•2标准切片5μm微米是临床病理最常用的标准厚度，平衡了细节清晰度和操作便捷性5适用情景常规病理诊断、染色、免疫组化•HE优势组织完整性好，染色均匀，操作相对简单•特点一般组织结构清晰可见，细胞核染色适中•实际应用几乎所有常规病理切片、组织学研究•3厚切片10μm微米厚切片适用于特殊研究目的，保留了更多的组织整体结构信息10适用情景神经组织研究、脂肪染色、三维重建•优势组织层次感强，特殊染色反应更明显•缺点细胞结构可能重叠，核细节不如薄切片清晰•实际应用脑组织研究、肌肉纤维走向分析•切片厚度直接影响分辨率表现厚度每增加，理论分辨率约下降但过薄切片操作难度增加，且易碎裂实际应1μm10%用中应根据研究目的和样品特性选择合适厚度实验室安全规范化学试剂安全废弃物处理固定剂安全废液分类甲醛福尔马林致癌物，需通风橱操作含甲醛废液专用容器收集•/•戴双层手套，避免皮肤接触有机溶剂废液防爆容器存放••溢出时用碳酸氢钠中和重金属废液特殊标记，单独处理•5%•有机溶剂固体废弃物二甲苯、丙酮易燃易爆，远离火源废弃组织生物危险袋封装••使用防爆电器，配备灭火器锐器（刀片等）锐器盒收集••废液单独收集，不得倒入水槽污染物品高压灭菌后处理••染色剂个人防护部分染料有致突变性，避免吸入实验服避免化学试剂接触皮肤••重金属染料（铅、铬等）需特别注意护目镜防止试剂溅入眼睛••口罩防止有害气体吸入•安全不只是规定，更是习惯每次实验前检查防护设备，熟悉应急措施和洗眼器位置所有试剂必须有清晰标签，过期试剂及时处理切勿在实验区饮食，离开前彻底洗手常见制样失误解析组织脱落背景污染染色不均原因载玻片处理不当、固定不充分或染色过程中机械损原因载玻片不洁、染色液过滤不彻底或水质问题原因染色液配制不当、染色时间控制不准确或固定不均伤匀解决使用超纯水，染色液使用前过滤，严格清洁载玻片解决使用正电荷载玻片，延长固定时间，温和操作染色解决按标准配制染色液，精确控制染色时间，确保固定步骤充分切片伪影分析材料样品常见问题气泡伪影包埋过程中空气未排净金属样品划痕抛光不充分或清洁不当••刀痕切片刀有缺口或钝化聚合物熔融切片速度过快产生热量••挤压伪影切片时压力过大粉体团聚分散不充分或介质选择不当••撕裂伪影组织硬度不均或脱水不充分边缘效应样品边缘过度蚀刻••解决方案检查并维护切片机，调整切片参数解决方案调整工艺参数，优化处理条件••青少年实验室制样案例洋葱表皮细胞制片详细步骤洋葱表皮是最经典的细胞观察材料，结构简单明了，制备方便，非常适合初学将洋葱切成小块，从内侧鳞片叶取下一小片透明表皮

1.者用镊子将表皮平铺在载玻片中央，注意不要折叠

2.所需材料滴加滴清水，轻轻展平组织

3.1-2可选滴加滴碘液染色，增强细胞壁和细胞核可见度

4.1新鲜洋葱•斜放盖玻片一边，缓慢放下，避免气泡

5.载玻片和盖玻片•用滤纸吸取多余液体

6.解剖针或镊子•低倍镜下找到视野，再转高倍观察细胞结构

7.滴管•碘液（碘碘化钾溶液）•-滤纸•×分钟400595%放大倍数制作时间成功率最佳观察倍率，可清晰观察细胞壁、细胞质和细胞从取材到完成制片的全程时间，适合课堂实验即使是初学者也能轻松制作出清晰可观察的样品核高级进阶制样技巧超薄连续切片技术激光显微切割技术连续超薄切片可用于三维重建研究，要求每张切片从复杂组织中精确分离特定细胞群，用于后续分子厚度一致且无缺失生物学分析使用高精度电动切片机，厚度设定在样品制备需避免降解•2-3μm•RNA/DNA样品块修整为梯形，利于切片排列使用特殊薄膜载玻片辅助收集••切片带收集在特殊涂层纸带上免疫荧光标记可辅助目标细胞识别••连续切片同时染色，确保染色一致性激光精度可达单细胞水平••使用数字图像采集系统记录每张切片切割后立即进行分子提取，避免降解••透明化大体样本技术整体组织透明化允许深层三维成像，无需切片、、等技术路线•CLARITY CUBICiDISCO去除脂质同时保留组织结构•折射率匹配液体提升透明度•荧光标记结合光片显微镜成像•可实现毫米级深度的高分辨成像•这些先进技术对样品制备提出了更高要求，通常需要专业设备支持和丰富经验尤其是分子水平研究，整个制样过程需严格防止核酸酶和蛋白酶污染，并控制固定和处理时间，确保分子完整性批量自动化制样趋势自动化设备发展效率与一致性提升组织处理自动机自动切片系统程序控制固定、脱水、透明、浸蜡全流程机器人辅助连续切片••处理容量可达个样本厚度误差控制在±•200•

0.5μm温度、时间精确控制每小时可处理个样品••50-100试剂自动更换，减少人工操作切片自动转移至载玻片••自动包埋中心自动染色平台恒温石蜡储存和分配多种染色方案并行处理••样品和包埋盒自动对位试剂精确添加和时间控制••冷却系统控制石蜡凝固速率条形码识别样品类型••样品识别和追踪系统防交叉污染设计••质控点监测确保染色质量•300%95%70%效率提升一致性试剂节约与手工制样相比，自动化制样大幅提高样品处理量标准化流程确保样品质量高度一致，减少人为误差精确控制试剂用量，减少浪费，降低成本成像优化与制样关系载玻片清洁度左侧为标准超声清洗处理的载玻片，背景干净无杂质；右侧为普通擦拭的载玻片，可见灰尘和指纹残留，极大影响图像质量清洁的载玻片是高质量成像的基础，特别是在高倍放大时更为明显切片厚度影响最佳切片厚度可提供清晰的细胞结构和良好的分辨率过厚的切片会导致细胞重叠，影响细节观察；而过薄的切片则染色不足，对比度低厚度通常是理想选择，兼顾细节显示和操作便捷性5μm染色质量对比优质染色应显示清晰的结构对比，色彩均匀且适中过度染色会掩盖细节，染色不足则对比度不够染色液的新鲜度、值和染色时间都是影响成像质量的关键因素不同组织需要调整染色方案pH信噪比是显微成像的核心指标，由样品信号强度与背景噪声之比决定高质量的制样工作可将信噪比提高倍，即使使用普通显微设备，也能获得接近专业级的成像效果相反，即使使用高端显微系统，制样不良也会严重限制成像质量3-5显微成像系统与制样适配1明场显微镜制样要点最基础的显微技术，适用于染色后的样品观察样品厚度通常为，确保光线透过•5-10μm染色是关键，提供结构间的对比度•染色最为常用，显示基本组织结构•HE载玻片和盖玻片厚度应标准化•封片剂需与物镜油匹配折射率•2相差显微镜制样特点适用于活体未染色样品的观察，增强透明结构对比度样品需极薄，通常小于•5μm活细胞悬液最适合相差观察•盖玻片厚度必须与物镜匹配•培养细胞直接在培养皿中观察•避免气泡和厚度不均现象•3荧光显微镜特殊需求用于观察特定荧光标记的结构，需特殊制样处理避免自发荧光，选用专用低荧光载玻片•固定方法应保留抗原性，偏好固定•PFA封片剂需防荧光淬灭如•ProLong Gold标本应避免长时间光照，防止漂白•背景控制至关重要，需彻底清洗•显微成像系统与制样方法必须协同优化例如，共聚焦显微镜需控制样品厚度在以内，并需特殊封片剂维持荧光；而偏光显微镜则20μm要求样品具有双折射特性，制样时应避免应力影响制样前明确成像目标，能事半功倍特殊样品活细胞成像活细胞制样环境要求特殊载体与培养系统温度控制活细胞成像容器哺乳动物细胞维持°恒温玻底培养皿透光性好，适合高倍观察•37C•使用显微镜温控系统或加热台多孔板适合多样本平行实验••温度波动控制在±°以内灌流腔适合长时间观察和药物处理•

0.5C•微流控芯片精确控制微环境气体环境•细胞培养表面处理维持₂浓度平衡值•5%CO pH湿度控制在以上防止蒸发聚赖氨酸增强贴壁细胞附着•95%•微环境培养箱或密封培养皿胶原蛋白模拟细胞外基质环境••提供三维培养支持光照控制•Matrigel纤连蛋白特定细胞类型贴壁•最小化照明强度减少光毒性•使用红外光源降低能量损伤•间歇采集减少暴露时间•实验前天11细胞接种至成像容器，密度控制在，确保单层生长，避免重叠培养在标准条件下过夜，使细30-50%胞充分贴壁并恢复正常生长状态2实验前小时4根据实验需要添加荧光探针或标记物活细胞染料如核、线粒体或钙离子指示HoechstMitoTracker剂，按说明书推荐浓度和时间处理成像前分钟330更换为无酚红培养基减少背景荧光，预热显微镜台和环境控制系统校准聚焦系统，设置最佳曝光参数，尽量减少光照强度显微成像制样3D一致性染色连续切片制备所有切片必须使用完全相同的染色方案和时间，确保颜色和对比度一致性理重建的基础是高质量连续切片系列使用自动切片机，设置一致厚度通常想情况下，应在同一批次同时染色所有切片自动染色机可有效减少批次差异3D，收集完整的连续序列每片都应编号标记，确保顺序正确切片厚对于特殊标记，荧光染色通常优于常规染色3-5μm度直接影响轴分辨率，需根据目标结构大小调整Z体积数据重建图像采集标准化使用专业软件如、对图像序列进行对齐、重叠校正和三维重建Amira ImageJ使用相同的显微镜设置物镜、光圈、曝光采集所有切片图像高精度电动载这一过程对切片质量要求极高，任何变形、褶皱或缺失都会导致重建失真最物台确保精确定位每张切片应包含参考标记点，辅助后续图像对齐图像分终模型可进行虚拟切片或立体可视化分析辨率应足够高，通常需要万像素以上1000替代方法光学切片透明化技术除物理切片外，共聚焦显微镜和光片显微镜可直接获取光学切片这种方法要求、、等透明化技术可使整个组织变透明，允许光线深入CLARITY CUBICSeeDB样品透明化处理，但避免了物理切片可能引入的形变渗透这些方法保持组织完整性，特别适合神经网络和血管系统的三维成像材料样品的预处理切割与取样使用低速精密切割机截取代表性样品，通常大小切割过程中应避免过热和机1cm³械变形，可使用冷却液降温切割面应平整，并标记观察方向金属样品应考虑晶粒方向，纤维材料注意纤维走向打磨与粗抛使用砂纸系列逐级打磨样品表面每100#→400#→800#→1200#→2000#级砂纸打磨方向应与前一级垂直，直到前一级划痕完全消失打磨后超声清洗，去除磨屑和杂质金属样品通常需水冷却防止变形精密抛光使用金刚石抛光膏在抛光布上精抛抛光力度轻柔均匀，3μm→1μm→

0.5μm保持转速在最后阶段可使用氧化铝或二氧化硅悬浮液进行化学机械150-300rpm抛光，获得镜面效果抛光质量直接影响最终观察效果蚀刻与显示选择适合材料的蚀刻剂进行表面处理，显示微观结构钢铁材料常用硝酸酒精；3-5%铝合金用试剂；铜合金用氯化铁溶液控制蚀刻时间秒，过度蚀刻会Keller5-30破坏表面细节，影响观察准确性聚合物和塑料样品案例聚合物样品制备难点解决方案与技巧聚合物材料因其柔软性、热敏性和静电特性，在显微样品制备中存在特殊挑战低温切片法主要难点将聚合物样品冷却至玻璃化转变温度以下通常至°，使其变硬后进行切片这种方法特别适用于弹性体和热塑性塑料-40-80C热敏性易在切片过程中产生热变形超薄切片技术•弹性回弹切片后尺寸不稳定•使用金刚石刀超薄切片机，可获得厚度的切片，适合透射光观察切片速度控制在以下，避免热变形100-500nm1mm/s静电吸附容易吸附灰尘和杂质•表面处理低对比度多数聚合物透明或半透明••溶剂敏感性常用试剂可能溶解样品

1.抗静电处理使用抗静电剂或离子风机镀层增强纳米级金或碳喷涂增强导电性

2.染色增强锇酸或钌红染色增加对比度

3.纤维增强复合材料聚合物共混物碳纤维玻璃纤维增强环氧树脂的横截面制样使用低速金刚石切割，树脂包埋后精密抛光染色处理可区分纤维与基体，分析纤维取共混物相分离结构观察超薄切片后选择性溶剂蚀刻，或染色处理增强相间对比显微红外光谱可同时分析化学组成分布，/PS/PMMA向、分布和界面结合质量揭示材料微观结构与性能关系常用问题集锦FAQ制样基础问题为什么我的组织切片总是有气泡？Q:气泡通常来自三个环节包埋过程中石蜡未完全渗透；切片展平时水温过高；封片时操作过快解决方法A:123是延长包埋时间，控制水浴温度在°，封片时缓慢放置盖玻片40-45C如何防止切片在染色过程中脱落？Q:使用或多聚赖氨酸处理载玻片，增强附着力；延长烘烤时间至小时；染色操作要轻柔，避免剧烈晃动；必A:APES2要时可使用黏附剂如蛋白甘油材料样品问题金属样品观察总是有划痕，如何避免？Q:划痕主要来自抛光过程确保每级砂纸后彻底清洗样品；抛光布定期清洁；抛光悬浮液保持新鲜；最后阶段使用A:振动抛光机避免用手直接接触抛光面，防止指纹和油脂污染聚合物样品切片时常常变形或卷曲，如何解决？Q:尝试降低切片温度，可使用干冰或液氮预冷；降低切片速度至以下；选用更锋利的刀片；对于特别柔软A:

0.5mm/s的材料，可考虑树脂包埋增强硬度；或使用压片法替代切片染色与成像问题染色后细胞核颜色过深，几乎看不清结构，如何修正？Q:HE核染色过深通常是苏木精染色时间过长或分化不足可使用盐酸酒精进行额外分化，短时浸泡秒后用A:1%5-10流水冲洗，反复至满意为止下次染色时缩短苏木精染色时间为什么显微镜下看到大量不明颗粒干扰观察？Q:颗粒可能来自染色液未过滤、水质问题或载玻片清洁不当确保所有染色液使用滤膜过滤；使用蒸馏水A:

0.22μm或超纯水冲洗；载玻片使用无粉手套操作，避免指纹和灰尘污染检查与质控制样参数记录详细记录固定、包埋、切片和染色的全部参数，样品编码包括试剂批号、浓度、处理时间和温度标准操每个样品应有唯一标识码，包含日期、样品类型作流程确保一致性，任何偏离都应记录并SOP和序号采用防水标签，位置统一建立样品登说明原因这些记录是质量问题追溯的基础记系统，记录来源和处理信息，确保可追溯性双人核对减少标识错误风险显微检查每批样品抽取进行质量检查，评估切片完10%整性、染色均匀性和背景清洁度使用标准评分系统分对关键指标进行量化评估低于1-53分的样品需重新制备定期校准显微镜确保评估数据分析与改进准确性汇总质控数据，分析失败原因和趋势识别薄弱对照样品比对环节，有针对性地改进工艺定期技术培训和能与标准对照样品比对，确认处理效果每批次应力评估确保操作人员技能建立持续改进机制，包含已知的阳性和阴性对照特殊染色和免疫组不断提高样品质量化必须有对应对照，验证反应特异性对照样品结果异常提示整批次可能存在问题真实实验室案例分析一某医院病理科切片流程实录问题与改进策略实验室基本情况主要问题该三甲医院病理科日均处理样本例，包括手术标本、活检和细胞学部分切片出现褶皱和气泡左右200•15%标本设备包括两台组织处理机、三台包埋机、四台切片机和两台自动小活检组织常脱落左右•8%染色机技术人员名，分为取材、包埋切片和染色三个工作组12急诊冷冻切片质量不稳定•工作流程特殊染色背景高，影响判读•标本接收与登记双人核对，条码系统追踪改进措施

1.取材与固定中性福尔马林，小时

2.10%6-24引入商业化粘附载玻片，脱落率降至•2%脱水与包埋自动处理机过夜程序

3.调整水浴温度至°，褶皱率降低•42C50%切片与染色厚度，常规染色

4.3-4μm HE标准化冷冻切片操作流程，并增加培训•质量控制主治医师审核，随机复检

5.10%更换高纯度染料，并严格过滤染色液•建立质量跟踪系统，每月分析问题原因•改进后，该实验室的合格率从提升至，诊断周期从平均小时缩短至小时关键是建立了完整的质量管理体系，将制样环节标准化，并实85%96%3624施技术人员定期培训与考核真实实验室案例分析二材料检测实验室概况聚合物制样流程某新材料研发公司的检测实验室主要负责聚合物和复该实验室开发了适用于多种聚合物的制样方案，包括合材料的结构分析，每月处理约个样品设备包80括光学显微镜、偏光显微镜、激光共聚焦显微镜和材精密低温切割°条件下微米级切片

1.-40C料制样系统技术人员名，其中名专职负责样品42树脂辅助包埋提高软质聚合物硬度制备

2.选择性染色使用锇酸、硫酸溶液等

3.镜面抛光纳米级氧化铝悬浮液抛光

4.蚀刻处理显示相结构和晶体形态

5.主要挑战与解决方案该实验室面临的主要挑战包括挑战热敏性聚合物切片变形严重•解决开发液氮速冻低温切片技术•+挑战多相聚合物界面保存困难•解决特殊包埋剂配方和缓慢固化程序•挑战透明聚合物相间对比度低•解决开发双重选择性染色方案•该实验室通过不断优化制样工艺，成功将聚合物样品制备时间从原来的天缩短至小时，同时提高了观察清晰度他24们的经验是针对不同聚合物特性开发专用制样方案，而非使用通用方法；同时建立材料工艺数据库，积累经验数据，-实现快速方案选择国内外制样标准与规范国内标准体系国际标准体系国家标准标准ISO金相试样制备方法测试和校准实验室能力认可•GB/T13298•ISO17025医疗器械生物学评价医学实验室质量和能力要求•GB/T16886•ISO15189医学检验实验室质量和能力要求色彩测量规范•YY/T0294•ISO18314测量方法与结果的准确度•GB/T6379标准ASTM行业标准金相试样制备标准•ASTM E3病理科质量管理规范显微分析评估和报告指南•WS/T208•ASTM E2015测量不确定度评定与表示医疗器械组织学评价标准•JJF1059•ASTM F2259材料显微分析方法•SN/T1764医学病理领域要求医学病理领域强调样品可追溯性和诊断准确性标准规定固定时间不少于小时，石蜡包埋不少于小时，切片厚度为质控要求每张切片设一个阳性对照，技术人员需定期能力评估美国病理633-5μm50CAP学家协会认证是国际金标准材料科学领域要求材料领域注重测量精度和重复性金相制样标准规定抛光后表面粗糙度应小于，蚀刻条件需精确控制复合材料切片要求方向偏差小于°，界面完整无分离电子显微镜样品制备有更严格规范，污染

0.05μm5控制在纳米级研究领域灵活性基础研究领域标准相对灵活，但仍需遵循基本原则实验方案应详细记录以确保可重复性，关键步骤如固定时间、染色浓度需严格控制发表论文时需提供完整制样方法，使他人能重复验证新方法需与已建立标准方法比对验证最新技术与发展趋势展望全自动化制样实验室自动化程度不断提高，从样品收集到染色的全流程无人化机器人系统可执行精确切片，自动判断切片质量并调整参数这些系统减少人为差异，提高样品一致性，特别适合大规模样本处理预计年内将成为大型实验室标配5数字病理学传统玻片正被数字化扫描系统取代，制样后直接生成高分辨率数字图像这种转变要求更高质量的制样以确保扫描准确性算法AI可自动检测制样质量问题，并提供改进建议数字化也简化了远程会诊和二次分析，大幅提升工作效率微流控制样技术微流控芯片集成了样品处理的多个步骤，包括细胞分离、固定、染色等这种实验室芯片大大减少了样品用量和处理时间，特别适合稀有样本分析一些先进系统甚至可在单芯片上完成从提取到测序的全流程，为精准医疗提供支持DNA智能质控与大数据大数据分析和人工智能正在改变质量控制方式通过分析历史制样数据，系统可预测潜在问题并提供预防措施机器学习算法能AI从数百万张切片图像中学习最佳制样参数，为不同样品类型提供个性化方案，持续优化制样质量1近期趋势年1-3标准化自动制样系统普及，数字化工作流整合现有设备，基于云的质量管理系统推广，减少试剂用量的环保制样方案发展2中期发展年3-5辅助制样参数优化，活体组织快速无损成像技术成熟，纳米级精准制样系统商用化，基于光谱技术的实时质量监测系统推广AI3远期展望年5-10全息三维制样与成像技术革新传统切片，分子水平非破坏性分析减少物理制样需求，完全自主式智能制样系统实现从样本到诊断的全流程自动化必备学习资源和参考书目经典教材与指南在线学习资源《组织学技术手册》作者李祥年，科学出版社中国病理网提供病理学制样视频教程--《病理技术与诊断》作者王恩华，人民卫生出版社显微技术网分享最新显微制样方法--《显微镜样品制备技术》作者张志成，化学工业出版社材料学会资源库金相制样标准与案例--《材料显微分析原理与技术》作者刘忠范，清华大学出版社约翰霍普金斯大学在线教程-Histology Guide-《》作者尼康显微学习平台Theory andPractice ofHistological Techniques-Bancroft JDMicroscopy U-《》作者免费显微技术课程Histopathological Techniques-Culling CFAiBiology MicroscopyCourse-《》作者Metallographic Preparationof Materials-Buehler Ltd.视频资源哔哩哔哩显微技术课堂实操视频教程--英文教学视频YouTube-Microscopy Mastery-学术期刊推荐专业社群与组织开源数据库与工具跟踪前沿制样技术的重要期刊包括《显微镜学研究与技加入中国电子显微镜学会、中国病理生理学会等专业组提供人体组织样片库；Human ProteinAtlas术》、《组织化学与细胞化学》、《实验室研究与方法》织可获取行业资讯与培训机会国际组织如美国显微镜包含材料显微图像数据库；Materials ProjectImageJ等这些期刊经常发表最新制样方法和技术改进国内学会和国际细胞学会提供丰富资源参加年是免费的显微图像分析软件；平台收录了大MSA ICSProtocols.io期刊如《显微镜学报》、《解剖学报》和《材料研究学度学术会议是了解最新制样技术的有效途径量开放制样方案利用这些资源可加速学习并验证自己报》也有相关技术报道的制样效果总结与互动讨论标准化流程精细操作高质量制样的首要原则是遵循标准化流程每显微样品制备是精细工作，细节决定成败从个步骤都有明确的参数控制，如固定时间、脱载玻片清洁到切片厚度，从染色时间到封片气水梯度、包埋条件等标准化不仅提高样品质泡，每个微小环节都可能影响最终效果培养量，也确保实验结果可重复建立实验室制样匠人精神，对每步操作精益求精，是制备高并严格执行是基础保障质量样品的关键SOP技术创新适应性调整制样技术在不断发展，新材料、新设备和新方不同样品有不同特性，制样方案需根据具体情法不断涌现保持学习心态，关注领域前沿，况灵活调整了解样品的物理化学性质，掌握尝试应用新技术解决传统难题，将使您的制样各种制样技术的适用条件，能在实践中灵活应能力始终保持领先水平勇于创新是推动显微用并解决问题，是成为制样专家的必要能力技术发展的动力本课程全面介绍了光学显微镜制样的核心技术与要点，从基础理论到实践操作，从传统方法到前沿趋势掌握这些知识和技能，将使您能够制备出高质量的显微样品，为科研、医学诊断或材料分析提供可靠基础现在邀请各位就制样过程中遇到的具体问题进行提问和讨论，也欢迎分享您的宝贵经验让我们共同探讨，不断提升显微制样的技术水平！。