核酸检测生物安全课件

核酸检测生物安全课件第一章核酸检测与生物安全概述核酸检测的关键作用生物安全的定义与重要性核酸检测是传染病早期诊断、疫情监生物安全是指采取一系列防护措施，测和防控的核心技术手段，在新冠疫防止病原微生物意外释放或人为滥情防控中发挥着不可替代的作用，能用，保护实验室工作人员、公众健康够快速准确地识别病原体，为临床诊和环境免受生物危害它是核酸检测疗和公共卫生决策提供科学依据工作的生命线和基础保障新冠病毒检测安全等级新冠病毒生物学特性与风险等级病原体分类与管理新型冠状病毒（SARS-CoV-2）被列入第二类病原微生物管理范畴，具有较强的传染性和致病性病毒主要通过呼吸道飞沫和密切接触传播，也可能通过气溶胶在特定环境下传播实验室风险分级根据病原体的危害程度和操作类型，实验室被划分为不同生物安全等级核酸检测属于诊断性检测，基本要求为BSL-2级别活病毒培养、动物感染实验等高风险操作则需要在BSL-3实验室进行核酸检测实验室的生物安全等级灭活样本处理BSL-3级别要求经过有效灭活处理的样本，病毒活性已被彻BSL-2级别要求涉及活病毒培养、分离鉴定、动物感染实验底破坏，可以在BSL-2及以下级别实验室进新冠病毒核酸检测应在生物安全二级实验室等高风险操作时，必须在生物安全三级实验行后续核酸提取和检测操作，大大降低了生（BSL-2）进行，配备生物安全柜、高压灭室（BSL-3）进行，实验室需具备更严格的物安全风险菌器等基本设施，操作人员需接受专业培训物理隔离和负压控制系统并采取适当防护措施生物安全实验室分级体系生物安全实验室根据所处理病原体的危害程度和操作风险，分为四个等级（BSL-1至BSL-4）级别越高，防护要求越严格BSL-1适用于对健康成人无致病性的微生物；BSL-2适用于对人体有中等危害的病原体；BSL-3用于可通过气溶胶传播的严重致病微生物；BSL-4则用于高度危险且无有效预防和治疗措施的病原体核酸检测实验室的基础设施要求实验室布局与区域划分生物安全柜配置实验室应合理划分清洁区、半污染区核酸检测实验室必须配备II级生物安和污染区，遵循单向流程原则，避免全柜（Class II），用于样本处理、人流、物流交叉各区域之间应设置核酸提取等高风险操作生物安全柜缓冲间和传递窗，确保样本和废弃物通过HEPA过滤器过滤空气，形成负的安全转移压保护环境，防止气溶胶扩散空气过滤与负压系统实验室应配备高效空气过滤系统，采用HEPA过滤器净化排风污染区相对于清洁区应保持负压状态，压差不小于5Pa，确保空气从低风险区向高风险区流动，防止病原体外泄个人防护装备（）规范PPE必备防护装备实验服一次性或可高温消毒的专用防护服，防止衣物污染手套双层乳胶或丁腈手套，必要时更换外层手套防护面罩全面型防护面罩或护目镜，防止飞溅物接触眼睛口罩医用N95或更高级别口罩，有效过滤气溶胶穿脱要点穿戴PPE需按照从内到外、从上到下的顺序；脱卸时则相反，遵循从外到内、从上到下的原则，避免污染清洁区域整个过程需在指定区域完成，并有同伴监督样本采集与运输安全管理采集后4小时内长途运输要求标本采集后应在室温条件下尽快送检，原则上不超过4长途运输需使用干冰冷藏保存，温度控制在-70℃左小时样本管应密封良好，外部使用75%酒精擦拭消右包装必须符合UN2814（A类感染性物质）或毒，放入密封袋中UN3373（B类生物制品）国际运输标准12342-4小时内送检运输资质管理建立快速转运通道，确保样本在2-4小时内送达实验跨地区样本运输需办理准运证，运输人员需接受生物室转运过程中应保持直立状态，避免剧烈震荡导致安全培训，运输车辆需配备应急处置装备，确保全程样本泄漏或破损安全合规样本保存与管理规范短期保存（24小时内）高风险样本管理样本库管理制度24小时内未检测的标本应在-70℃冷冻保来自高风险人员（如确诊患者密接者、境外建立专门的生物样本库，设置专库专柜，实存，以保持核酸完整性若实验室条件不入境人员）的样本，检测完成后需在-20℃行专人管理样本存取需严格登记，记录样足，可临时使用-20℃冰箱保存，但需尽快条件下至少保存7天，以备复核或追溯检测本编号、来源、保存时间等信息，防止样本转移至-70℃环境使用泄露、丢失或误用核酸检测操作流程中的生物安全措施样本接收与灭活前样本接收、开盖、分装等灭活前操作必须在BSL-2实验室的生物安全柜内进行，操作人员需穿戴三级防护装备，包括防护服、N95口罩、护目镜、双层手套和防护面屏样本灭活处理使用56℃水浴或专用灭活液（如含胍盐裂解液）对样本进行灭活处理，确保病毒完全失活灭活效果需经过验证，确保后续操作的安全性灭活后操作样本经有效灭活后，核酸提取、PCR体系配制等操作可在BSL-2实验室进行，防护等级可适当降低，但仍需严格遵守无菌操作规范，避免交叉污染关键提示整个操作过程需严格避免气溶胶产生，禁止在开放环境中进行高风险操作，所有涉及样本的操作均需在生物安全柜内完成生物安全柜标准操作规范生物安全柜是核酸检测实验室最重要的防护设备操作前需提前10-15分钟开启安全柜，确保气流稳定工作区域应保持整洁，避免堵塞气流格栅操作时手臂应缓慢进出，避免破坏气幕保护操作结束后，安全柜需继续运行10-15分钟，确保污染空气完全排出定期进行现场检测，确保过滤效率和气流速度符合标准实验室废弃物管理废液分类处理固体废物处理锐器专项管理实验室废液分为普通污水和感染性废接触过样本的固体废弃物（如吸头、针头、刀片、破碎玻璃等锐器必须立液两类普通污水可直接排入下水离心管、培养皿等）属于感染性废即放入专用的防刺穿、防渗漏容器道；感染性废液（接触过样本的液物，需收集在黄色医疗废物袋中，经中容器装满3/4时需密封并标注感染体）必须经化学消毒（如含氯消毒剂121℃高压蒸汽灭菌30分钟后，按医疗性废物-锐器字样，经灭菌处理后交专处理30分钟）或物理消毒（高压蒸汽废物处置流程交由有资质的单位处业机构处置，严禁混入普通垃圾灭菌）后才能排放理废弃物处理具体流程消毒验证标准•感染性废液消毒后需进行效果验证，确保病原体彻底灭活•采用生物指示剂监测灭菌效果，嗜热脂肪芽孢杆菌孢子杀灭率应≥

99.99%•建立消毒处理记录，包括时间、温度、压力、消毒剂浓度等参数过滤器维护HEPA过滤器每年至少进行一次现场检漏测试，确保过滤效率≥

99.97%发现破损或效率下降需及时更换，更换下的过滤器需按感染性废物处理实验室常见生物安全事故及应急处理生物安全柜污染事故情景样本在安全柜内洒落或容器破损1处理立即停止操作，保持安全柜运行状态使用浸有

0.55%有效氯消毒液（5500ppm）的吸水材料覆盖污染区域，作用30分钟后清理工作台面用消毒液擦拭两遍，间隔15分钟操作完成后安全柜继续运行30分钟培养器皿破损污染情景培养皿、试管等在开放环境中破损2处理立即关闭实验室，禁止人员进出用消毒纱布或吸水纸覆盖污染区域，倒上消毒液浸透，作用1小时必要时对整个实验室进行空间熏蒸消毒，人员暂时撤离空间熏蒸消毒3方法一过氧乙酸熏蒸，用量为1-2g/m³，相对湿度60-80%，密闭作用1-2小时方法二甲醛-高锰酸钾熏蒸，甲醛10ml/m³+高锰酸钾5g/m³，相对湿度60-80%，密闭作用8-10小时后通风实验室人员生物安全培训与管理01岗前培训新进人员必须接受不少于40学时的生物安全理论和实践培训，内容包括病原微生物特性、实验室规章制度、标准操作规程、应急处置等，考核合格后方可上岗02定期再培训在岗人员每年至少参加一次生物安全继续教育培训，更新知识、强化操作技能培训形式包括理论授课、案例分析、应急演练等，确保人员始终掌握最新规范03规范执行严格执行《病原微生物实验室生物安全通用准则》（GB19489）和《实验室生物安全手册》（WHO第三版）要求，建立标准操作规程（SOP），确保每个环节有章可循04设备管理实验室所有生物安全相关设备需建立档案，定期维护保养、性能校验和现场检测生物安全柜、高压灭菌器等关键设备每年至少检测一次，确保安全性能符合标准核酸检测实验室设备介绍高压灭菌锅生物安全柜离心机PCR扩增仪用于培养基、器皿、废弃物的灭菌II级A2型或B2型生物安全柜是核酸配备生物安全密封转子和防气溶胶实时荧光定量PCR仪是核酸检测的处理标准灭菌条件121℃，压检测的核心防护设备，通过HEPA过盖的离心机，用于样本离心分离核心设备，通过热循环扩增目标基力15psi（103kPa），持续30分滤和层流气幕提供人员、样本和环操作时需确保离心管平衡、盖紧，因片段并实时监测荧光信号仪器钟大型物品或废弃物可能需要延境三重保护，必须每年进行现场检离心结束后需静置5分钟再打开，防需定期校准温度准确性和荧光检测长时间至45-60分钟测认证止气溶胶扩散灵敏度液氮罐与超低温冰箱自动移液器用于样本和试剂的长期保存液氮精密移液工具，分为单道和多道，罐温度可达-196℃，适合长期储容量范围

0.1μl-1000μl使用前需校存；超低温冰箱（-80℃）用于日常准准确度和精密度，定期保养，避样本保存需定期检查温度记录，免交叉污染高风险操作建议使用确保储存条件稳定带滤芯的吸头实验室无菌操作技术要点工作台面消毒防止交叉污染技巧操作前后需用75%酒精或

0.1%新洁尔灭溶液擦拭工作台面和常用器具生物安全柜工作台面分区操作试剂准备、样本处理、扩增分析严格分区需用紫外线照射30分钟，或用消毒剂擦拭后再用酒精去除残留单向流程人员和物品流向从清洁区到污染区，不得逆行试剂与培养基准备频繁更换手套接触不同样本或试剂后需更换外层手套使用一次性耗材吸头、离心管等尽量使用一次性用品•所有试剂配制需在无菌环境中进行及时清理每个操作步骤后立即清理工作台面•培养基需高压灭菌或过滤除菌后分装•试剂瓶开启后应尽快使用，避免长时间暴露•移液前需更换吸头，避免不同试剂交叉污染核酸提取与扩增的安全操作PCR核酸提取前准备PCR体系配制扩增产物管理样本需先经56℃水浴30分钟或使用含裂解PCR反应体系配制应在专门的试剂准备PCR扩增产物含有大量目标片段，是污染液的核酸提取试剂进行灭活处理所有操区进行，严禁在扩增区或样本处理区配的主要来源扩增完成后，反应管需在扩作在生物安全柜内进行，使用专用移液制使用专用移液器和吸头，避免扩增增区打开，不得带回样本处理区或试剂准器，避免气溶胶产生提取完成后的核酸产物污染配制完成的反应体系应尽快备区废弃扩增产物需加入含氯消毒剂灭溶液病毒活性已消失，可在普通工作台进加入模板并进行扩增活后按感染性废物处理行后续操作分区管理原则核酸检测实验室必须严格划分试剂准备区、样本处理区、扩增区三个独立区域，人员、物品、空气流向单向流动，防止交叉污染各区域需配备专用实验服、移液器等设备，不得混用实验室标准分区示意PCR标准PCR实验室采用物理隔离的三区分离或四区分离布局试剂准备区配制PCR反应混合液，该区域为正压，相对其他区域压力最高样本处理区进行核酸提取，该区域相对试剂区为负压扩增区PCR扩增和产物分析，该区域负压最大，防止扩增产物外泄如采用四区分离，可增设产物分析区，进一步降低污染风险各区域之间通过传递窗或缓冲间连接，确保单向流程实验室安全文化建设鼓励报告建立开放透明的安全隐患报告机制，鼓励员工及安全责任制时报告发现的安全问题和潜在风险，对报告者给实验室主任为生物安全第一责任人，各岗位明确予奖励，营造安全第

一、预防为主的文化氛安全职责建立层级管理体系，从实验室负责人围到普通操作人员，人人有责、人人尽责持续改进定期开展安全检查和风险评估，分析事故案例和隐患原因，不断完善安全管理体系将PDCA（计划-执行-检查-改进）循环应用于安全管理全过程制度保障建立健全生物安全管理制度体系，包括操作规全员参与程、应急预案、培训计划、检查记录等，确保安安全文化建设需要全员参与，通过培训、演练、全管理有据可依、有章可循经验分享等方式，提升每个人的安全意识和技能定期组织安全文化活动，增强团队凝聚力新冠病毒核酸检测相关法规与标准123《中华人民共和国生物安全法》国家卫生健康委实验室生物安全指医疗机构核酸检测工作手册南2021年4月15日起施行，明确了病原微生物《医疗机构新型冠状病毒核酸检测工作手册实验室的生物安全管理要求，规定从事病原发布了《新型冠状病毒实验室生物安全指（试行第二版）》明确了医疗机构开展核酸微生物实验活动应当遵守实验室生物安全规南》（第二版），详细规定了不同操作类型检测的基本条件、实验室设置要求、检测流定和技术标准，采取安全防范措施违反规的生物安全防护要求、实验室设施标准、人程、质量控制、生物安全管理等内容，指导定可能面临停业整顿、罚款甚至刑事责任员培训要求、应急处置流程等，是核酸检测医疗机构规范开展检测工作实验室的操作指南核酸检测实验室质量控制与风险评估质量控制体系建立覆盖检测全过程的质量控制体系，包括样本采集、运输、接收、检测、报告各环节每批次检测需设置阳性对照、阴性对照和内标对照，监测试剂性能和操作准确性定期参加室间质量评价，与其他实验室比对，确保检测结果准确可靠风险评估机制每年至少开展一次全面的生物安全风险评估，识别潜在危险源、评估风险等级、制定控制措施重点关注样本处理、废弃物管理、设备故障、人员操作等高风险环节风险评估结果应形成报告，并根据评估结果优化安全管理措施环境与健康监测•定期监测实验室空气质量、表面清洁度•检测废水、废气排放是否达标•记录温湿度、压差等环境参数•建立人员健康档案，定期体检•监测职业暴露情况，及时干预核酸检测实验室废水处理技术化学消毒采用含氯消毒剂（有效氯500-1000mg/L）或废水收集过氧乙酸（

0.2-

0.5%）处理废水，接触时间不实验室废水通过专用管道收集至废水处理系少于1小时定期监测余氯浓度，确保消毒效统，与生活污水分开收集池需密闭，防止气果溶胶逸出和异味扩散物理消毒小型实验室可采用高温高压灭菌方式处理废水，温度121℃，压力103kPa，持续30分钟此方法灭菌彻底但能耗较高达标排放效果验证处理后的废水需符合《医疗机构水污染物排放标准》（GB18466-2005）要求后方可排入市消毒后的废水需进行微生物学检测，粪大肠菌政污水管网建立排放记录台账群数500MPN/L，余氯≥

0.5mg/L定期委托第三方检测机构进行全面检测核酸检测实验室锐器安全管理专用容器使用规范锐器专用收集容器必须具备防刺穿、防渗漏、防跌落性能，外表需标注损伤性废物警示标识和生物危害符号容器应放置在操作区域便于取用的位置,避免远距离持锐器移动增加受伤风险容器装满3/4时需及时封口并更换新容器操作安全三大禁令禁止用手折断针头折断过程极易刺伤手部;禁止弯曲针头弯曲后的针头更不稳定，易发生意外;禁止回插针帽回插针帽是锐器伤最常见原因，使用后的针头应直接投入锐器盒如必须回插，应采用单手回帽法或使用专用回帽装置事故暴露应急处理一旦发生针刺伤或割伤，应立即挤出伤口血液，用肥皂水和流动清水冲洗15分钟，75%酒精或

0.5%碘伏消毒2小时内报告实验室负责人和院感科，进行暴露风险评估24小时内启动暴露后预防措施，必要时进行疫苗接种或药物预防建立暴露档案，定期随访监测实验室事故案例分析事故经过某地一核酸检测实验室在样本前处理过程中，因操作人员未在生物安全柜内打开样本管盖子，而是在开放工作台上操作，导致样本喷溅产生气溶胶实验室空调系统将气溶胶扩散到相邻办公区域，造成3名非实验室人员暴露处理措施

1.立即封闭实验室和受污染区域

2.对暴露人员进行医学观察和检测

3.用过氧乙酸对相关区域进行空间熏蒸消毒

4.排查空调系统，发现回风口未安装高效过滤器

5.暂停实验室运行，进行全面整改经验教训严格遵守操作规程所有样本操作必须在生物安全柜内进行加强人员培训确保每位操作人员都清楚了解生物安全要求完善设施设备实验室通风系统需定期检查维护强化监督检查建立日常巡查制度，及时发现和纠正违规行为预防建议制定详细的标准操作规程（SOP）并上墙公示；建立师傅带徒弟的传帮带机制；安装视频监控系统，记录关键操作过程；定期开展应急演练，提升人员应对突发事件的能力核酸检测实验室人员健康保护次年100%2/24h乙肝疫苗接种率健康检查频率暴露后响应时间所有实验室人员上岗前必须完成乙肝疫苗全程接实验室人员每年至少进行两次健康体检，包括血发生职业暴露后，需在24小时内进行风险评估并种，并检测抗体滴度抗体阴性者需加强免疫常规、肝肾功能、胸部X线、传染病筛查等项启动预防措施，包括疫苗接种、药物预防等目职业暴露监测心理健康支持建立职业暴露登记制度，记录每次暴露的时间、原因、处理措施和随访核酸检测人员长期面对高强度工作和生物安全压力，需关注其心理健结果对高风险岗位人员进行重点监测，定期检测相关病原体抗体水康提供心理咨询服务，组织减压活动，合理安排工作和休息时间建平，评估感染风险发现异常及时采取干预措施，必要时调离岗位立同伴支持系统，鼓励员工之间相互交流和支持，营造温暖的工作氛围新技术在核酸检测生物安全中的应用自动化核酸提取封闭式检测系统信息化管理平台自动化核酸提取设备通过机械臂和密闭系统完一体化封闭式核酸检测系统将样本加载、核酸实验室信息管理系统（LIMS）实现了样本从成样本裂解、核酸吸附、洗涤、洗脱等步骤，提取、PCR扩增、结果分析集成在一个密闭的采集、运输、接收、检测到报告的全流程电子全程无需人工接触样本，大幅降低了操作人员仪器内完成，实现样本进、结果出的全自动化追踪每个样本赋予唯一条形码，避免人工的暴露风险设备可同时处理96个样本，提检测流程系统内部保持负压，避免气溶胶泄登记错误系统记录操作人员、时间、设备等高了检测通量和效率漏，显著提升了生物安全性信息，保障样本安全和结果可追溯自动化核酸检测的未来场景随着人工智能、机器人、物联网等技术的发展，未来的核酸检测实验室将实现更高水平的自动化和智能化全自动样本分拣系统、智能机器人配送、远程监控和诊断、大数据质控分析等技术将广泛应用人员主要承担监督管理职责,极大降低了直接接触病原体的风险同时,标准化、模块化的实验室设计将使得快速建立和扩展检测能力成为可能,更好地应对突发公共卫生事件未来核酸检测生物安全发展趋势标准化与法规完善国家将进一步完善核酸检测实验室生物安全法律法规体系,制定更加详细的技术标准和操作指南推动生物安全管理的标准化、规范化、精细化,建立统一的认证认可体系和监督检查机制加强国际合作,与WHO等国际组织接轨,提升我国生物安全管理水平新型防护材料与设备创新研发更加舒适、高效的个人防护装备,如透气性更好的防护服、佩戴更舒适的呼吸器等开发新一代生物安全柜,提升过滤效率和能源效率创新废弃物处理技术,如等离子体灭菌、电子束辐照等绿色环保技术,减少化学消毒剂使用和环境污染跨学科合作推动技术升级生物安全是一个复杂的系统工程,需要生物学、医学、工程学、信息学、管理学等多学科协同创新加强产学研合作,推动科研成果转化应用建立国家级生物安全研究平台,开展前沿技术攻关培养复合型生物安全专业人才,建设一支高素质的生物安全管理队伍筑牢核酸检测生物安全防线守护公共健康生物安全是生命线全员参与共同守护持续提升能力水平核酸检测在传染病防控中发挥着关键作用,而生物生物安全不是某个人或某个部门的责任,而是需要生物安全管理是一个持续改进的过程通过不断安全是确保检测工作顺利开展的根本保障每一全员参与的系统工程从管理者到操作人员,从后学习新知识、掌握新技术、总结新经验,我们的生个环节的疏忽都可能导致严重后果,必须始终将生勤保障到质量控制,每个人都是生物安全链条上的物安全意识和能力将不断提升,共同构建安全、高物安全放在首位重要一环效、可靠的核酸检测环境让我们携手并进,以专业的态度、严谨的作风、创新的精神,为保障人民生命健康安全作出更大贡献!。