核酸检测上岗考核试题及答案汇总

核酸检测上岗考核试题及答案汇总

一、单选题（每题1分，共15分）

1.核酸检测操作前，工作人员应首先进行（）（1分）A.洗手B.更换手套C.戴口罩D.消毒工作台面【答案】C【解析】核酸检测操作前，应首先佩戴口罩，以防止口鼻分泌物污染样品和试剂

2.核酸提取过程中，应使用（）进行样品的裂解（1分）A.酚-氯仿B.乙醇C.PBS缓冲液D.DEPC水【答案】A【解析】酚-氯仿是常用的核酸提取试剂，能有效裂解细胞，释放核酸

3.核酸扩增过程中，常用的引物长度为（）（1分）A.15-20bpB.20-25bpC.25-30bpD.30-35bp【答案】B【解析】核酸检测中常用的引物长度为20-25bp，能有效特异性扩增目标序列

4.核酸检测中，荧光信号的强度与（）成正比（1分）A.样品浓度B.扩增效率C.检测时间D.仪器精度【答案】A【解析】荧光信号的强度与样品中目标核酸的浓度成正比

5.核酸检测的阳性判断标准通常为（）（1分）A.Ct值小于等于35B.Ct值大于等于35C.荧光信号强度大于阈值D.荧光信号强度小于阈值【答案】C【解析】阳性判断标准通常为荧光信号强度大于设定的阈值

6.核酸提取过程中，常用的洗涤剂是（）（1分）A.SDSB.TritonX-100C.SDS和TritonX-100D.SDS和乙醇【答案】C【解析】核酸提取过程中常用SDS和TritonX-100联合使用，提高洗涤效果

7.核酸扩增过程中，退火温度通常在（）℃范围内（1分）A.50-65B.60-75C.70-85D.80-95【答案】B【解析】核酸检测的退火温度通常在60-75℃范围内，以保证引物与模板的特异性结合

8.核酸检测中，常用的内对照是（）（1分）A.GAPDHB.β-actinC.18SrRNAD.COX1【答案】C【解析】核酸检测中常用的内对照是18SrRNA，能有效反映样品的提取和扩增效率

9.核酸提取过程中，常用的核酸沉淀剂是（）（1分）A.异丙醇B.乙醇C.乙酸D.氯仿【答案】A【解析】核酸提取过程中常用异丙醇沉淀核酸，提高核酸回收率

10.核酸检测中，常用的荧光染料是（）（1分）A.SYBRGreenIB.EthidiumBromideC.DAPID.Hoechst33258【答案】A【解析】核酸检测中常用SYBRGreenI荧光染料，能有效结合核酸并发出荧光信号

11.核酸扩增过程中，延伸温度通常在（）℃范围内（1分）A.72B.75C.80D.85【答案】A【解析】核酸检测的延伸温度通常在72℃范围内，以保证DNA聚合酶的活性

12.核酸检测中，常用的移液器是（）（1分）A.1mLB.5mLC.10mLD.20mL【答案】A【解析】核酸检测中常用1mL移液器，以精确吸取小体积样品和试剂

13.核酸提取过程中，常用的裂解缓冲液是（）（1分）A.Tris-HClB.PBS缓冲液C.RIPA裂解缓冲液D.TE缓冲液【答案】C【解析】核酸提取过程中常用RIPA裂解缓冲液，能有效裂解细胞并释放核酸

14.核酸检测中，常用的荧光定量PCR仪是（）（1分）A.ABI7500B.Roche480C.AppliedBiosystems7500D.Alloftheabove【答案】D【解析】核酸检测中常用的荧光定量PCR仪包括ABI

7500、Roche480和AppliedBiosystems7500等

15.核酸检测的阴性判断标准通常为（）（1分）A.Ct值大于等于40B.Ct值小于等于40C.荧光信号强度小于阈值D.荧光信号强度大于阈值【答案】C【解析】阴性判断标准通常为荧光信号强度小于设定的阈值

二、多选题（每题2分，共10分）

1.核酸检测的操作流程包括（）（2分）A.样品采集B.样品前处理C.核酸提取D.核酸扩增E.结果判读【答案】A、B、C、D、E【解析】核酸检测的操作流程包括样品采集、样品前处理、核酸提取、核酸扩增和结果判读等步骤

2.核酸提取过程中，常用的试剂包括（）（2分）A.裂解缓冲液B.洗涤缓冲液C.异丙醇D.氯仿E.SDS【答案】A、B、C、D、E【解析】核酸提取过程中常用的试剂包括裂解缓冲液、洗涤缓冲液、异丙醇、氯仿和SDS等

3.核酸扩增过程中，常用的PCR反应体系包括（）（2分）A.DNA模板B.引物C.DNA聚合酶D.dNTPsE.缓冲液【答案】A、B、C、D、E【解析】核酸检测的PCR反应体系包括DNA模板、引物、DNA聚合酶、dNTPs和缓冲液等成分

4.核酸检测中，常用的质量控制方法包括（）（2分）A.内对照B.空白对照C.阳性对照D.阴性对照E.回收率测定【答案】A、B、C、D、E【解析】核酸检测常用的质量控制方法包括内对照、空白对照、阳性对照、阴性对照和回收率测定等

5.核酸检测中，常用的样品类型包括（）（2分）A.上呼吸道拭子B.下呼吸道拭子C.血液D.尿液E.粪便【答案】A、B、C、D、E【解析】核酸检测常用的样品类型包括上呼吸道拭子、下呼吸道拭子、血液、尿液和粪便等

三、填空题（每题2分，共10分）

1.核酸检测的操作过程中，应严格遵循______原则，防止交叉污染（2分）【答案】无菌操作【解析】核酸检测的操作过程中，应严格遵循无菌操作原则，防止交叉污染

2.核酸提取过程中，常用的核酸沉淀剂是______（2分）【答案】异丙醇【解析】核酸提取过程中常用异丙醇沉淀核酸，提高核酸回收率

3.核酸扩增过程中，常用的引物长度为______（2分）【答案】20-25bp【解析】核酸检测中常用的引物长度为20-25bp，能有效特异性扩增目标序列

4.核酸检测中，常用的荧光染料是______（2分）【答案】SYBRGreenI【解析】核酸检测中常用SYBRGreenI荧光染料，能有效结合核酸并发出荧光信号

5.核酸检测的阳性判断标准通常为______（2分）【答案】荧光信号强度大于阈值【解析】阳性判断标准通常为荧光信号强度大于设定的阈值

四、判断题（每题1分，共10分）

1.核酸检测操作前，工作人员应首先进行洗手（）（1分）【答案】（×）【解析】核酸检测操作前，应首先佩戴口罩，以防止口鼻分泌物污染样品和试剂

2.核酸提取过程中，应使用酚-氯仿进行样品的裂解（）（1分）【答案】（√）【解析】酚-氯仿是常用的核酸提取试剂，能有效裂解细胞，释放核酸

3.核酸扩增过程中，常用的引物长度为15-20bp（）（1分）【答案】（×）【解析】核酸检测中常用的引物长度为20-25bp，能有效特异性扩增目标序列

4.核酸检测中，荧光信号的强度与样品浓度成正比（）（1分）【答案】（√）【解析】荧光信号的强度与样品中目标核酸的浓度成正比

5.核酸检测的阳性判断标准通常为Ct值小于等于35（）（1分）【答案】（×）【解析】阳性判断标准通常为荧光信号强度大于设定的阈值

6.核酸提取过程中，常用的洗涤剂是SDS（）（1分）【答案】（×）【解析】核酸提取过程中常用SDS和TritonX-100联合使用，提高洗涤效果

7.核酸扩增过程中，退火温度通常在60-75℃范围内（）（1分）【答案】（√）【解析】核酸检测的退火温度通常在60-75℃范围内，以保证引物与模板的特异性结合

8.核酸检测中，常用的内对照是18SrRNA（）（1分）【答案】（√）【解析】核酸检测中常用的内对照是18SrRNA，能有效反映样品的提取和扩增效率

9.核酸提取过程中，常用的核酸沉淀剂是乙醇（）（1分）【答案】（×）【解析】核酸提取过程中常用异丙醇沉淀核酸，提高核酸回收率

10.核酸检测中，常用的荧光染料是EthidiumBromide（）（1分）【答案】（×）【解析】核酸检测中常用SYBRGreenI荧光染料，能有效结合核酸并发出荧光信号

五、简答题（每题2分，共10分）

1.简述核酸检测的操作流程（2分）【答案】核酸检测的操作流程包括样品采集、样品前处理、核酸提取、核酸扩增和结果判读等步骤【解析】核酸检测的操作流程包括样品采集、样品前处理、核酸提取、核酸扩增和结果判读等步骤

2.简述核酸提取过程中常用的试剂及其作用（2分）【答案】核酸提取过程中常用的试剂包括裂解缓冲液、洗涤缓冲液、异丙醇、氯仿和SDS等裂解缓冲液用于裂解细胞，释放核酸；洗涤缓冲液用于洗涤核酸，去除杂质；异丙醇用于沉淀核酸；氯仿用于去除脂质；SDS用于裂解细胞和去污【解析】核酸提取过程中常用的试剂包括裂解缓冲液、洗涤缓冲液、异丙醇、氯仿和SDS等裂解缓冲液用于裂解细胞，释放核酸；洗涤缓冲液用于洗涤核酸，去除杂质；异丙醇用于沉淀核酸；氯仿用于去除脂质；SDS用于裂解细胞和去污

3.简述核酸扩增过程中常用的PCR反应体系及其作用（2分）【答案】核酸检测的PCR反应体系包括DNA模板、引物、DNA聚合酶、dNTPs和缓冲液等成分DNA模板是扩增的模板；引物是特异性结合到模板的引物，启动扩增；DNA聚合酶是合成DNA的酶；dNTPs是合成DNA的原料；缓冲液提供反应所需的pH和离子环境【解析】核酸检测的PCR反应体系包括DNA模板、引物、DNA聚合酶、dNTPs和缓冲液等成分DNA模板是扩增的模板；引物是特异性结合到模板的引物，启动扩增；DNA聚合酶是合成DNA的酶；dNTPs是合成DNA的原料；缓冲液提供反应所需的pH和离子环境

4.简述核酸检测中常用的质量控制方法（2分）【答案】核酸检测常用的质量控制方法包括内对照、空白对照、阳性对照、阴性对照和回收率测定等内对照能有效反映样品的提取和扩增效率；空白对照用于检测试剂污染；阳性对照用于检测扩增系统的有效性；阴性对照用于检测样品污染；回收率测定用于评估样品处理的完整性【解析】核酸检测常用的质量控制方法包括内对照、空白对照、阳性对照、阴性对照和回收率测定等内对照能有效反映样品的提取和扩增效率；空白对照用于检测试剂污染；阳性对照用于检测扩增系统的有效性；阴性对照用于检测样品污染；回收率测定用于评估样品处理的完整性

5.简述核酸检测中常用的样品类型及其特点（2分）【答案】核酸检测常用的样品类型包括上呼吸道拭子、下呼吸道拭子、血液、尿液和粪便等上呼吸道拭子和下呼吸道拭子用于采集呼吸道分泌物，血液用于检测血液中的核酸，尿液用于检测尿液中的核酸，粪便用于检测粪便中的核酸【解析】核酸检测常用的样品类型包括上呼吸道拭子、下呼吸道拭子、血液、尿液和粪便等上呼吸道拭子和下呼吸道拭子用于采集呼吸道分泌物，血液用于检测血液中的核酸，尿液用于检测尿液中的核酸，粪便用于检测粪便中的核酸

六、分析题（每题10分，共20分）

1.分析核酸检测的操作过程中，如何防止交叉污染？（10分）【答案】核酸检测的操作过程中，防止交叉污染的措施包括使用一次性耗材、设置单独的操作区域、使用独立的工作台面、定期消毒工作台面、避免样品和试剂的混合、使用负压吸引装置等【解析】核酸检测的操作过程中，防止交叉污染的措施包括使用一次性耗材、设置单独的操作区域、使用独立的工作台面、定期消毒工作台面、避免样品和试剂的混合、使用负压吸引装置等

2.分析核酸检测中，如何确保结果的准确性？（10分）【答案】核酸检测中，确保结果的准确性的措施包括使用高质量的试剂、严格控制操作条件、设置内对照和空白对照、定期进行质控检测、使用标准化的操作流程等【解析】核酸检测中，确保结果的准确性的措施包括使用高质量的试剂、严格控制操作条件、设置内对照和空白对照、定期进行质控检测、使用标准化的操作流程等

七、综合应用题（每题25分，共50分）

1.某实验室进行核酸检测操作，请设计一套完整的操作流程，并说明每一步骤的目的（25分）【答案】核酸检测的操作流程包括样品采集、样品前处理、核酸提取、核酸扩增和结果判读等步骤样品采集采集上呼吸道拭子或下呼吸道拭子，确保样品的代表性和完整性样品前处理将拭子放入裂解缓冲液中，充分悬浮，去除杂质核酸提取使用裂解缓冲液裂解细胞，释放核酸，通过洗涤去除杂质，最后用异丙醇沉淀核酸核酸扩增将提取的核酸加入PCR反应体系中，包括DNA模板、引物、DNA聚合酶、dNTPs和缓冲液，进行PCR扩增结果判读通过荧光定量PCR仪检测扩增产物，根据荧光信号强度判断结果【解析】核酸检测的操作流程包括样品采集、样品前处理、核酸提取、核酸扩增和结果判读等步骤样品采集采集上呼吸道拭子或下呼吸道拭子，确保样品的代表性和完整性样品前处理将拭子放入裂解缓冲液中，充分悬浮，去除杂质核酸提取使用裂解缓冲液裂解细胞，释放核酸，通过洗涤去除杂质，最后用异丙醇沉淀核酸核酸扩增将提取的核酸加入PCR反应体系中，包括DNA模板、引物、DNA聚合酶、dNTPs和缓冲液，进行PCR扩增结果判读通过荧光定量PCR仪检测扩增产物，根据荧光信号强度判断结果

2.某实验室进行核酸检测质控，请设计一套完整的质控方案，并说明每一步骤的目的（25分）【答案】核酸检测的质控方案包括内对照、空白对照、阳性对照、阴性对照和回收率测定等内对照使用内对照能有效反映样品的提取和扩增效率空白对照用于检测试剂污染，确保结果的准确性阳性对照用于检测扩增系统的有效性，确保扩增条件适宜阴性对照用于检测样品污染，确保结果的可靠性回收率测定用于评估样品处理的完整性，确保样品处理的规范性【解析】核酸检测的质控方案包括内对照、空白对照、阳性对照、阴性对照和回收率测定等内对照使用内对照能有效反映样品的提取和扩增效率空白对照用于检测试剂污染，确保结果的准确性阳性对照用于检测扩增系统的有效性，确保扩增条件适宜阴性对照用于检测样品污染，确保结果的可靠性回收率测定用于评估样品处理的完整性，确保样品处理的规范性

八、完整标准答案

一、单选题

1.C

2.A

3.B

4.A

5.C

6.C

7.B

8.C

9.A

10.A

11.A

12.A

13.C

14.D

15.C

二、多选题

1.A、B、C、D、E

2.A、B、C、D、E

3.A、B、C、D、E

4.A、B、C、D、E

5.A、B、C、D、E

三、填空题

1.无菌操作

2.异丙醇

3.20-25bp

4.SYBRGreenI

5.荧光信号强度大于阈值

四、判断题

1.（×）

2.（√）

3.（×）

4.（√）

5.（×）

6.（×）

7.（√）

8.（√）

9.（×）

10.（×）

五、简答题

1.核酸检测的操作流程包括样品采集、样品前处理、核酸提取、核酸扩增和结果判读等步骤

2.核酸提取过程中常用的试剂包括裂解缓冲液、洗涤缓冲液、异丙醇、氯仿和SDS等裂解缓冲液用于裂解细胞，释放核酸；洗涤缓冲液用于洗涤核酸，去除杂质；异丙醇用于沉淀核酸；氯仿用于去除脂质；SDS用于裂解细胞和去污

3.核酸扩增过程中常用的PCR反应体系包括DNA模板、引物、DNA聚合酶、dNTPs和缓冲液等成分DNA模板是扩增的模板；引物是特异性结合到模板的引物，启动扩增；DNA聚合酶是合成DNA的酶；dNTPs是合成DNA的原料；缓冲液提供反应所需的pH和离子环境

4.核酸检测常用的质量控制方法包括内对照、空白对照、阳性对照、阴性对照和回收率测定等内对照能有效反映样品的提取和扩增效率；空白对照用于检测试剂污染；阳性对照用于检测扩增系统的有效性；阴性对照用于检测样品污染；回收率测定用于评估样品处理的完整性

5.核酸检测常用的样品类型包括上呼吸道拭子、下呼吸道拭子、血液、尿液和粪便等上呼吸道拭子和下呼吸道拭子用于采集呼吸道分泌物，血液用于检测血液中的核酸，尿液用于检测尿液中的核酸，粪便用于检测粪便中的核酸

六、分析题

1.核酸检测的操作过程中，防止交叉污染的措施包括使用一次性耗材、设置单独的操作区域、使用独立的工作台面、定期消毒工作台面、避免样品和试剂的混合、使用负压吸引装置等

2.核酸检测中，确保结果的准确性的措施包括使用高质量的试剂、严格控制操作条件、设置内对照和空白对照、定期进行质控检测、使用标准化的操作流程等

七、综合应用题

1.核酸检测的操作流程包括样品采集、样品前处理、核酸提取、核酸扩增和结果判读等步骤样品采集采集上呼吸道拭子或下呼吸道拭子，确保样品的代表性和完整性样品前处理将拭子放入裂解缓冲液中，充分悬浮，去除杂质核酸提取使用裂解缓冲液裂解细胞，释放核酸，通过洗涤去除杂质，最后用异丙醇沉淀核酸核酸扩增将提取的核酸加入PCR反应体系中，包括DNA模板、引物、DNA聚合酶、dNTPs和缓冲液，进行PCR扩增结果判读通过荧光定量PCR仪检测扩增产物，根据荧光信号强度判断结果

2.核酸检测的质控方案包括内对照、空白对照、阳性对照、阴性对照和回收率测定等内对照使用内对照能有效反映样品的提取和扩增效率空白对照用于检测试剂污染，确保结果的准确性阳性对照用于检测扩增系统的有效性，确保扩增条件适宜阴性对照用于检测样品污染，确保结果的可靠性回收率测定用于评估样品处理的完整性，确保样品处理的规范性。