核酸培训考试试题及完整答案

核酸培训考试试题及完整答案

一、单选题（每题2分，共20分）

1.核酸检测样本采集时，棉签在口咽部停留的时间通常是（）（2分）A.5秒B.10秒C.15秒D.20秒【答案】C【解析】口咽拭子采样时，棉签应在口咽部旋转采样至少15秒，确保样本充分采集

2.以下哪种物质是核酸的组成成分？（）（2分）A.脂肪B.蛋白质C.糖类D.核苷酸【答案】D【解析】核酸由核苷酸组成，核苷酸包括碱基、糖和磷酸基团

3.PCR检测中，用于扩增目的片段的引物长度通常是（）（2分）A.10-15个碱基B.15-20个碱基C.20-25个碱基D.25-30个碱基【答案】C【解析】PCR引物长度一般为20-25个碱基，能特异性结合目标序列

4.核酸电泳时，用于分离核酸片段的凝胶材料通常是（）（2分）A.聚丙烯酰胺B.琼脂糖C.聚乙烯醇D.淀粉【答案】B【解析】琼脂糖凝胶是核酸电泳最常用的分离介质，适用于常规片段分析

5.逆转录PCR（RT-PCR）实验中，需要添加的关键酶是（）（2分）A.聚合酶B.限制性内切酶C.连接酶D.核酸外切酶【答案】A【解析】RT-PCR需要逆转录酶将RNA转化为cDNA，然后使用DNA聚合酶扩增

6.核酸杂交实验中，探针的标记方式不包括（）（2分）A.放射性同位素标记B.荧光标记C.生物素标记D.酶标记【答案】C【解析】生物素标记常用于WesternBlot，而非核酸杂交探针

7.高效核酸提取时，常用的裂解缓冲液pH值范围通常是（）（2分）A.3-5B.5-7C.7-9D.9-11【答案】C【解析】核酸提取裂解缓冲液pH值通常控制在7-9，保持核酸稳定性

8.实时荧光PCR仪中，用于检测荧光信号的检测器是（）（2分）A.CCD相机B.PMTC.CMOS传感器D.EMCCD【答案】B【解析】荧光定量PCR采用光电倍增管（PMT）检测荧光信号强度

9.核酸序列测定中，Sanger测序法的基本原理是（）（2分）A.核酸杂交B.链终止反应C.核酸酶切D.电泳分离【答案】B【解析】Sanger测序通过链终止子随机终止延伸反应，形成不同长度的片段

10.用于核酸样品运输的保存液通常是（）（2分）A.生理盐水B.乙醇C.乙酸钠D.甘油【答案】B【解析】核酸样品运输保存液常用70-75%乙醇，能抑制降解酶活性

二、多选题（每题4分，共20分）

1.核酸提取过程中可能遇到的干扰因素包括（）（4分）A.蛋白酶B.多糖C.盐离子D.有机溶剂E.脂质【答案】A、B、C、E【解析】蛋白酶、多糖、盐离子和脂质都会干扰核酸提取纯度，有机溶剂是提取介质

2.PCR反应体系中必须包含的物质有（）（4分）A.Taq酶B.dNTPsC.引物D.cDNA模板E.Mg²⁺【答案】A、B、C、E【解析】PCR体系需含热稳定酶（Taq酶）、dNTPs、引物和Mg²⁺，模板可以是DNA或cDNA

3.核酸杂交实验中，影响杂交效率的因素包括（）（4分）A.温度B.盐浓度C.探针浓度D.反应时间E.缓冲液pH【答案】A、B、C、D【解析】杂交条件（温度、盐浓度）和反应物（探针浓度、时间）直接影响杂交效果，pH影响较小

4.核酸电泳中，凝胶电泳的目的包括（）（4分）A.分离核酸片段B.检测核酸存在C.定量核酸D.纯化核酸E.序列测定【答案】A、B、C【解析】电泳可分离、检测和定量核酸，但不是纯化或测序方法

5.RT-PCR实验中，可能出现的假阳性原因包括（）（4分）A.样本污染B.引物二聚体C.酶活性过高D.非特异性扩增E.试剂失效【答案】A、B、D【解析】样本污染、引物二聚体和非特异性扩增易导致假阳性，酶活性过高和试剂失效通常产生假阴性

三、填空题（每题4分，共16分）

1.核酸样品保存时，RNA样品通常需要加入______抑制RNA酶活性，并置于______保存（4分）【答案】RNA酶抑制剂；-80℃

2.PCR反应分为______、______和______三个阶段（4分）【答案】变性；退火；延伸

3.核酸杂交实验中，根据探针标记方式可分为______杂交和______杂交（4分）【答案】放射性；非放射性

4.核酸测序中，Sanger法常用的终止子是______、______、______和______（4分）【答案】ddATP；ddGTP；ddCTP；ddTTP

四、判断题（每题2分，共10分）

1.核酸样品运输时，应避免剧烈摇晃以防RNA降解（）（2分）【答案】（√）【解析】剧烈摇晃会剪切RNA链，应轻拿轻放

2.PCR扩增时，引物二聚体出现说明反应条件不合适（）（2分）【答案】（×）【解析】少量二聚体是正常现象，过量才表示条件有问题

3.琼脂糖凝胶电泳时，核酸片段迁移速度与分子量成正比（）（2分）【答案】（√）【解析】分子量越大，迁移速度越慢，呈反比关系

4.核酸杂交实验中，温度越高杂交特异性越强（）（2分）【答案】（×）【解析】高温易导致非特异性结合，低温提高特异性

5.实时荧光PCR可通过熔解曲线分析产物特异性（）（2分）【答案】（√）【解析】特异性产物有特征性熔解峰，非特异性产物峰形宽散

五、简答题（每题4分，共12分）

1.简述核酸提取的基本步骤（4分）【答案】

（1）细胞裂解使用裂解缓冲液破坏细胞结构，释放核酸；

（2）核酸分离通过离心、过滤或层析技术去除蛋白质、脂质等杂质；

（3）核酸纯化使用吸附柱、磁珠或凝胶过滤进一步纯化目标核酸；

（4）核酸洗脱用低盐或无盐缓冲液洗脱纯化后的核酸

2.PCR实验中，影响扩增效率的关键因素有哪些？（4分）【答案】

（1）引物设计特异性、GC含量、退火温度；

（2）酶活性Taq酶浓度和稳定性；

（3）反应条件温度梯度、循环数；

（4）模板质量纯度、浓度；

（5）反应体积避免过小导致抑制

3.区分DNA和RNA在结构和检测方法上的特点（4分）【答案】结构差异

（1）DNA双链，含脱氧核糖，A-T配对；

（2）RNA单链，含核糖，A-U配对检测方法

（1）DNA琼脂糖电泳、SouthernBlot、PCR；

（2）RNA NorthernBlot、RT-PCR、RT-Seq

六、分析题（每题10分，共20分）

1.分析PCR实验中出现非特异性扩增的原因及解决方法（10分）【答案】原因

（1）引物设计不当引物过长、GC含量不均、二级结构；

（2）退火温度过低导致引物非特异性结合；

（3）模板质量差含抑制物或降解产物；

（4）镁离子浓度不适宜过高易非特异性结合解决方法

（1）优化引物设计调整长度、GC比例，使用软件预测；

（2）优化退火温度逐步降低温度或梯度PCR；

（3）纯化模板使用柱纯化或酶处理去除抑制物；

（4）调整Mg²⁺浓度根据dNTP比例优化

2.比较实时荧光PCR与普通PCR在原理和用途上的区别（10分）【答案】原理区别

（1）实时荧光PCR在PCR延伸阶段检测荧光信号，实时监测产物积累；

（2）普通PCR终点检测，通过琼脂糖电泳观察产物用途区别

（1）实时荧光PCR-定量检测通过阈值循环数（Cq值）定量；-筛查检测快速检测大量样本（如传染病筛查）；-动态监测研究表达调控或药物干预效果

（2）普通PCR-定性检测验证存在性（如基因分型）；-序列扩增用于测序模板制备；-克隆验证检测PCR产物转化效率

七、综合应用题（每题25分，共50分）

1.设计一个检测特定病毒基因的RT-PCR实验方案（25分）【答案】实验方案

（1）样品采集与处理-采集咽拭子样本，立即加入RNA保存液（含RNA酶抑制剂）；-离心提取上清RNA，使用微量分光光度计测定浓度（100ng/μL）

（2）逆转录反应-反应体系（20μL）-RNA模板5μg；-5×RT缓冲液4μL；-dNTPs（10mM）2μL；-逆转录酶（20U/μL）1μL；-上游引物（10μM）1μL；-下游引物（10μM）1μL；-DEPC水补足至20μL-反应条件42℃反应60分钟，70℃终止10分钟

（3）PCR扩增-反应体系（25μL）-cDNA模板5μL；-10×PCR缓冲液

2.5μL；-dNTPs（10mM）

2.5μL；-上游引物（10μM）1μL；-下游引物（10μM）1μL；-Taq酶（5U/μL）

0.5μL；-MgCl₂（25mM）

1.5μL；-无菌水补足至25μL-PCR程序-95℃预变性3分钟；-95℃变性30秒；-退火（根据引物设计）30秒；-72℃延伸45秒；-35个循环；-72℃终延伸5分钟；-4℃保存

（4）结果检测-使用实时荧光PCR仪检测Cq值；-通过标准曲线定量病毒载量；-设置阴性对照（无模板）和阳性对照（质控品）

2.解释核酸杂交技术的原理，并举例说明其在临床诊断中的应用（25分）【答案】原理核酸杂交是利用碱基互补配对原则（A-T/U，G-C），使单链DNA或RNA与互补链结合形成双链的过程其关键条件包括

（1）足够长的互补区域确保稳定结合；

（2）适宜温度（通常37-55℃）和离子强度（提高稳定性）；

（3）探针标记（荧光、放射性）便于检测临床应用

（1）基因诊断-产前筛查通过荧光原位杂交（FISH）检测染色体异常；-肿瘤标志物检测用RNA探针检测癌基因表达（如HER2）

（2）病原体检测-病毒检测使用核酸芯片同时检测多种病原体（如流感、肝炎）；-细菌耐药性分析通过探针检测耐药基因（如NDM-1）

（3）基因表达研究-NorthernBlot检测mRNA表达水平；-ChIP-seq通过DNA-蛋白杂交分析转录调控完整标准答案（最后一页）

一、单选题

1.C

2.D

3.C

4.B

5.A

6.C

7.C

8.B

9.B

10.B

二、多选题

1.A、B、C、E

2.A、B、C、E

3.A、B、C、D

4.A、B、C

5.A、B、D

三、填空题

1.RNA酶抑制剂；-80℃

2.变性；退火；延伸

3.放射性；非放射性

4.ddATP；ddGTP；ddCTP；ddTTP

四、判断题

1.√

2.×

3.√

4.×

5.√

五、简答题

1.见答案

2.见答案

3.见答案

六、分析题

1.见答案

2.见答案

七、综合应用题

1.见答案

2.见答案。