DNA含量测定方法

及含量测定方法DNA RNA

一、光密度测定法［原理］DNA和RNA在260nm处有一很高的吸收峰，利用这个原理我们测其0D260,再推算出其浓度

一、光密度测定法［原理］DNA和RNA在260nm处有一很高的吸收峰，利用这个原理我们测其0D260,再推算出其浓度［仪器］分光光度计紫外可见光两用O［试齐］水，DNA或RNA溶液［操作］1取5ulDNA样品或4ulRNA样品加水到1ml2用1ml水做空白3把样品杯放在分光光度计比色槽上4每ul中DNA或RNA浓度ug将是0D值的10倍，例如稀释后样品在260nm处0D值为

0.2,则原DNA或RNA样品浓度为2ug/ul05如果想要检测样品的纯度，那么还要再测一次280nm处0D值，计算二者的比率，若比率接近2,则说明样品中核酸比较纯若比率小于

1.6,则说明蛋白或其它吸收此波长的杂质在其中，建议再用酚/氯仿抽提继以乙醇沉淀以除去杂质6如果想检测样品中是否残存酚等有机杂质，那么还要测定一次230nm处0D值

二、琼脂糖电泳测量法［原理］质粒DNA及微量DNA片段的浓度可与已知浓度的DNA同时进行电泳，根据结合的漠化乙锭荧光强度，估计其含量［仪器］紫外透射反射分析仪上海康华生化仪器制造厂；电泳槽；电泳梳；电泳仪［试齐”6X上样缓冲液

0.25%漠酚蓝；40%W/V糖10XTBE电泳缓冲液

0.89moi/LTris—硼酸；

0.02mol/LEDTANa2PH

8.3O

0.8%琼脂糖

0.8%琼脂糖；lOOmi1XTBE5mg/mlEB

0.5gEB；100ml三蒸水［操作］1用1XTBE电泳缓冲液

0.8%琼脂糖凝胶，加漠化乙锭其终浓度为

0.5ug/mlo2加热使琼脂糖熔化均匀，取出室温冷却至50-60℃3取一块5义7cm玻璃板，置水平台上，放一微型点样梳，点样梳底部离玻璃平板的距离为

0.5T.0mm04将凝胶小心倒在玻璃板上，待冷却后取出点样梳，保持点样孔的完好5取DNA样品及，DNA标准浓度各lul加入1XTBE4ul,加入6X上样缓冲液lul,混匀6在

0.8%琼脂糖凝胶点样孔小心点样，记录样品点样次数与点样量7打开电源开关，电压不超过5V/cm,一般40V,30-40分钟8取出泳动后的凝胶板，翻转玻璃盖在紫外分析仪观察DNA区带9DNA含量的估计比较待测DNA的条带与已知DNA的各条带的荧光密度，估计待测DNA在凝胶中的含量，再估计出其浓度。