贵州省PCR上岗培训常见试题及答案

贵州省PCR上岗培训常见试题及答案

一、单选题（每题1分，共10分）

1.PCR检测中，用于扩增目的基因的酶是（）（1分）A.DNA聚合酶B.RNA聚合酶C.蛋白酶D.解旋酶【答案】A【解析】PCR检测中，DNA聚合酶负责在引物指导下合成新的DNA链

2.下列哪个不是PCR反应体系的组成部分？（）（1分）A.模板DNAB.引物C.DNA聚合酶D.脱氧核苷三磷酸【答案】C【解析】PCR反应体系包含模板DNA、引物、DNA聚合酶和脱氧核苷三磷酸，选项C为干扰项

3.PCR扩增产物的大小可以通过（）检测（1分）A.琼脂糖凝胶电泳B.毛细管电泳C.荧光检测D.以上都是【答案】D【解析】PCR扩增产物可通过琼脂糖凝胶电泳、毛细管电泳和荧光检测等方法检测

4.PCR反应中，退火温度通常设定在（）℃（1分）A.50-65B.60-75C.70-85D.80-95【答案】B【解析】PCR反应中，退火温度通常设定在60-75℃之间，以使引物有效结合

5.PCR反应中，循环次数一般设定在（）次（1分）A.20-25B.25-30C.30-35D.35-40【答案】A【解析】PCR反应中，循环次数一般设定在20-25次，以保证扩增效率

6.PCR反应中，加入DMSO的目的是（）（1分）A.提高退火温度B.增强酶活性C.稳定DNA结构D.提高扩增特异性【答案】C【解析】DMSO可以稳定DNA结构，提高PCR扩增效率

7.PCR反应中，加入甘油的主要作用是（）（1分）A.提高PCR产物产量B.增加PCR反应粘度C.保护DNA聚合酶D.缩短扩增时间【答案】B【解析】甘油可以提高PCR反应液的粘度，有助于PCR反应的稳定进行

8.PCR反应中，加入BSA的目的是（）（1分）A.提高PCR扩增特异性B.增强DNA聚合酶活性C.稳定PCR反应体系D.降低退火温度【答案】C【解析】BSA可以稳定PCR反应体系，提高PCR扩增效率

9.PCR反应中，加入甜菜碱的目的是（）（1分）A.提高PCR扩增特异性B.增强DNA聚合酶活性C.稳定PCR反应体系D.降低退火温度【答案】C【解析】甜菜碱可以稳定PCR反应体系，提高PCR扩增效率

10.PCR反应中，加入MgCl2的目的是（）（1分）A.提高PCR扩增特异性B.增强DNA聚合酶活性C.稳定PCR反应体系D.降低退火温度【答案】B【解析】MgCl2是DNA聚合酶的辅因子，增强DNA聚合酶活性

二、多选题（每题2分，共10分）

1.PCR反应中，影响扩增效率的因素包括（）（2分）A.模板DNA浓度B.引物浓度C.DNA聚合酶浓度D.循环次数E.退火温度【答案】A、B、C、D、E【解析】PCR反应中，模板DNA浓度、引物浓度、DNA聚合酶浓度、循环次数和退火温度都会影响扩增效率

2.PCR反应中，加入抑制剂的原因包括（）（2分）A.提高PCR扩增特异性B.降低PCR反应温度C.稳定PCR反应体系D.防止非特异性扩增【答案】A、D【解析】加入抑制剂可以提高PCR扩增特异性，防止非特异性扩增

3.PCR反应中，加入dNTPs的目的是（）（2分）A.提供DNA合成的原料B.增强DNA聚合酶活性C.稳定PCR反应体系D.降低退火温度【答案】A【解析】dNTPs是DNA合成的原料，提供DNA合成的原料

4.PCR反应中，加入引物的作用包括（）（2分）A.指定扩增方向B.特异性结合模板DNAC.提高PCR扩增特异性D.增强DNA聚合酶活性【答案】A、B、C【解析】引物指定扩增方向，特异性结合模板DNA，提高PCR扩增特异性

5.PCR反应中，加入DNA聚合酶的原因包括（）（2分）A.合成新的DNA链B.延伸引物C.稳定PCR反应体系D.降低退火温度【答案】A、B【解析】DNA聚合酶合成新的DNA链，延伸引物

三、填空题（每题2分，共10分）

1.PCR反应中，退火温度通常设定在______℃之间（2分）【答案】60-75【解析】PCR反应中，退火温度通常设定在60-75℃之间，以使引物有效结合

2.PCR反应中，循环次数一般设定在______次（2分）【答案】20-25【解析】PCR反应中，循环次数一般设定在20-25次，以保证扩增效率

3.PCR反应中，加入DMSO的目的是______（2分）【答案】稳定DNA结构【解析】DMSO可以稳定DNA结构，提高PCR扩增效率

4.PCR反应中，加入甘油的主要作用是______（2分）【答案】增加PCR反应粘度【解析】甘油可以提高PCR反应液的粘度，有助于PCR反应的稳定进行

5.PCR反应中，加入BSA的目的是______（2分）【答案】稳定PCR反应体系【解析】BSA可以稳定PCR反应体系，提高PCR扩增效率

四、判断题（每题1分，共5分）

1.PCR反应中，加入MgCl2的目的是提高PCR扩增特异性（）（1分）【答案】（×）【解析】MgCl2是DNA聚合酶的辅因子，增强DNA聚合酶活性，而不是提高PCR扩增特异性

2.PCR反应中，加入引物的作用是提供DNA合成的原料（）（1分）【答案】（×）【解析】引物指定扩增方向，特异性结合模板DNA，而不是提供DNA合成的原料

3.PCR反应中，加入dNTPs的目的是增强DNA聚合酶活性（）（1分）【答案】（×）【解析】dNTPs是DNA合成的原料，提供DNA合成的原料，而不是增强DNA聚合酶活性

4.PCR反应中，加入甜菜碱的目的是提高PCR扩增特异性（）（1分）【答案】（×）【解析】甜菜碱可以稳定PCR反应体系，提高PCR扩增效率，而不是提高PCR扩增特异性

5.PCR反应中，加入DNA聚合酶的目的是降低退火温度（）（1分）【答案】（×）【解析】DNA聚合酶合成新的DNA链，延伸引物，而不是降低退火温度

五、简答题（每题2分，共10分）

1.简述PCR反应的基本原理（2分）【答案】PCR（聚合酶链式反应）是一种在体外快速扩增特定DNA片段的技术，基本原理是利用DNA聚合酶在引物指导下合成新的DNA链，通过变性、退火和延伸三个步骤的循环，使目的基因片段呈指数级扩增【解析】PCR反应的基本原理是利用DNA聚合酶在引物指导下合成新的DNA链，通过变性、退火和延伸三个步骤的循环，使目的基因片段呈指数级扩增

2.简述PCR反应中，加入DMSO的作用（2分）【答案】DMSO可以稳定DNA结构，提高PCR扩增效率，特别是在扩增GC-rich模板时，DMSO可以降低GC碱基对的解旋温度，提高PCR扩增效率【解析】DMSO可以稳定DNA结构，提高PCR扩增效率，特别是在扩增GC-rich模板时，DMSO可以降低GC碱基对的解旋温度，提高PCR扩增效率

3.简述PCR反应中，加入甘油的作用（2分）【答案】甘油可以提高PCR反应液的粘度，有助于PCR反应的稳定进行，特别是在高温PCR反应中，甘油可以保护DNA聚合酶，提高PCR扩增效率【解析】甘油可以提高PCR反应液的粘度，有助于PCR反应的稳定进行，特别是在高温PCR反应中，甘油可以保护DNA聚合酶，提高PCR扩增效率

4.简述PCR反应中，加入BSA的作用（2分）【答案】BSA可以稳定PCR反应体系，提高PCR扩增效率，特别是在扩增复杂模板时，BSA可以掩盖PCR反应中的抑制剂，提高PCR扩增效率【解析】BSA可以稳定PCR反应体系，提高PCR扩增效率，特别是在扩增复杂模板时，BSA可以掩盖PCR反应中的抑制剂，提高PCR扩增效率

5.简述PCR反应中，加入甜菜碱的作用（2分）【答案】甜菜碱可以稳定PCR反应体系，提高PCR扩增效率，特别是在扩增复杂模板时，甜菜碱可以提高PCR扩增特异性，减少非特异性扩增【解析】甜菜碱可以稳定PCR反应体系，提高PCR扩增效率，特别是在扩增复杂模板时，甜菜碱可以提高PCR扩增特异性，减少非特异性扩增

六、分析题（每题10分，共20分）

1.分析PCR反应中，影响扩增效率的因素有哪些？如何提高PCR扩增效率？（10分）【答案】PCR反应中，影响扩增效率的因素包括模板DNA浓度、引物浓度、DNA聚合酶浓度、循环次数、退火温度、PCR反应缓冲液pH值、PCR反应体积、PCR反应时间等提高PCR扩增效率的方法包括优化PCR反应条件、选择合适的引物、提高模板DNA浓度、选择高效的DNA聚合酶、优化PCR反应缓冲液pH值、优化PCR反应体积和PCR反应时间等【解析】PCR反应中，影响扩增效率的因素包括模板DNA浓度、引物浓度、DNA聚合酶浓度、循环次数、退火温度、PCR反应缓冲液pH值、PCR反应体积、PCR反应时间等提高PCR扩增效率的方法包括优化PCR反应条件、选择合适的引物、提高模板DNA浓度、选择高效的DNA聚合酶、优化PCR反应缓冲液pH值、优化PCR反应体积和PCR反应时间等

2.分析PCR反应中，如何防止非特异性扩增？（10分）【答案】PCR反应中，防止非特异性扩增的方法包括选择合适的引物、优化PCR反应条件、加入抑制剂、加入dNTPs、加入甜菜碱等选择合适的引物可以提高PCR扩增特异性，优化PCR反应条件可以提高PCR扩增效率，加入抑制剂可以防止非特异性扩增，加入dNTPs可以提供DNA合成的原料，加入甜菜碱可以提高PCR扩增特异性，减少非特异性扩增【解析】PCR反应中，防止非特异性扩增的方法包括选择合适的引物、优化PCR反应条件、加入抑制剂、加入dNTPs、加入甜菜碱等选择合适的引物可以提高PCR扩增特异性，优化PCR反应条件可以提高PCR扩增效率，加入抑制剂可以防止非特异性扩增，加入dNTPs可以提供DNA合成的原料，加入甜菜碱可以提高PCR扩增特异性，减少非特异性扩增

七、综合应用题（每题20分，共20分）

1.某PCR反应体系包含模板DNA、引物、DNA聚合酶、dNTPs、PCR反应缓冲液和MgCl2，请设计一个PCR反应方案，并说明每个步骤的作用（20分）【答案】PCR反应方案如下

（1）变性95℃1分钟，使模板DNA变性；

（2）退火55℃1分钟，使引物结合到模板DNA上；

（3）延伸72℃1分钟，DNA聚合酶延伸引物；

（4）重复步骤

（1）-

（3）30次；

（5）终止4℃5分钟，终止PCR反应每个步骤的作用如下

（1）变性95℃1分钟，使模板DNA变性，解开双链DNA；

（2）退火55℃1分钟，使引物结合到模板DNA上，特异性结合目的基因片段；

（3）延伸72℃1分钟，DNA聚合酶延伸引物，合成新的DNA链；

（4）重复步骤

（1）-

（3）30次，使目的基因片段呈指数级扩增；

（5）终止4℃5分钟，终止PCR反应，使PCR反应体系冷却【解析】PCR反应方案如下

（1）变性95℃1分钟，使模板DNA变性，解开双链DNA；

（2）退火55℃1分钟，使引物结合到模板DNA上，特异性结合目的基因片段；

（3）延伸72℃1分钟，DNA聚合酶延伸引物，合成新的DNA链；

（4）重复步骤

（1）-

（3）30次，使目的基因片段呈指数级扩增；

（5）终止4℃5分钟，终止PCR反应，使PCR反应体系冷却完整标准答案

一、单选题

1.A

2.C

3.D

4.B

5.A

6.C

7.B

8.C

9.C

10.B

二、多选题

1.A、B、C、D、E

2.A、D

3.A

4.A、B、C

5.A、B

三、填空题

1.60-

752.20-

253.稳定DNA结构

4.增加PCR反应粘度

5.稳定PCR反应体系

四、判断题

1.×

2.×

3.×

4.×

5.×

五、简答题

1.PCR（聚合酶链式反应）是一种在体外快速扩增特定DNA片段的技术，基本原理是利用DNA聚合酶在引物指导下合成新的DNA链，通过变性、退火和延伸三个步骤的循环，使目的基因片段呈指数级扩增

2.DMSO可以稳定DNA结构，提高PCR扩增效率，特别是在扩增GC-rich模板时，DMSO可以降低GC碱基对的解旋温度，提高PCR扩增效率

3.甘油可以提高PCR反应液的粘度，有助于PCR反应的稳定进行，特别是在高温PCR反应中，甘油可以保护DNA聚合酶，提高PCR扩增效率

4.BSA可以稳定PCR反应体系，提高PCR扩增效率，特别是在扩增复杂模板时，BSA可以掩盖PCR反应中的抑制剂，提高PCR扩增效率

5.甜菜碱可以稳定PCR反应体系，提高PCR扩增效率，特别是在扩增复杂模板时，甜菜碱可以提高PCR扩增特异性，减少非特异性扩增

六、分析题

1.PCR反应中，影响扩增效率的因素包括模板DNA浓度、引物浓度、DNA聚合酶浓度、循环次数、退火温度、PCR反应缓冲液pH值、PCR反应体积、PCR反应时间等提高PCR扩增效率的方法包括优化PCR反应条件、选择合适的引物、提高模板DNA浓度、选择高效的DNA聚合酶、优化PCR反应缓冲液pH值、优化PCR反应体积和PCR反应时间等

2.PCR反应中，防止非特异性扩增的方法包括选择合适的引物、优化PCR反应条件、加入抑制剂、加入dNTPs、加入甜菜碱等选择合适的引物可以提高PCR扩增特异性，优化PCR反应条件可以提高PCR扩增效率，加入抑制剂可以防止非特异性扩增，加入dNTPs可以提供DNA合成的原料，加入甜菜碱可以提高PCR扩增特异性，减少非特异性扩增

七、综合应用题

1.PCR反应方案如下

（1）变性95℃1分钟，使模板DNA变性；

（2）退火55℃1分钟，使引物结合到模板DNA上；

（3）延伸72℃1分钟，DNA聚合酶延伸引物；

（4）重复步骤

（1）-

（3）30次；

（5）终止4℃5分钟，终止PCR反应每个步骤的作用如下

（1）变性95℃1分钟，使模板DNA变性，解开双链DNA；

（2）退火55℃1分钟，使引物结合到模板DNA上，特异性结合目的基因片段；

（3）延伸72℃1分钟，DNA聚合酶延伸引物，合成新的DNA链；

（4）重复步骤

（1）-

（3）30次，使目的基因片段呈指数级扩增；

（5）终止4℃5分钟，终止PCR反应，使PCR反应体系冷却。