医学细胞实验培养案例课件

医学细胞实验培养案例课件演讲人目录

01.

02.前言病例介绍

03.

04.护理评估护理诊断

05.

06.护理目标与措施并发症的观察及护理

07.

08.健康教育总结前言前言我从事医学细胞培养护理工作已有12年，从最初在实验室跟着带教老师战战兢兢调显微镜，到现在能独立带教实习护士、参与科研项目的细胞培养支持，这段经历让我深刻体会到细胞培养不仅是一项技术操作，更是一场“与生命对话”的精细工程记得2021年春天，我参与了某肿瘤靶向药物研发的临床前实验，需要为科研团队提供患者原代肿瘤细胞的稳定培养当时有位年轻的实习护士问我“老师，细胞培养不就是配培养基、换液、传代吗？能有多难？”后来她跟着我连续观察了3天——第一天因未严格消毒超净台导致细胞污染，第二天因胰酶消化时间过长损伤细胞活性，第三天调整操作后终于看到细胞贴壁生长时，她红着眼眶说“原来每个步骤都像走钢丝，容不得半点马虎”前言这句话一直刻在我心里医学细胞培养是基础医学研究、药物研发、再生医学的“基石”，而护理工作在其中扮演着“守护者”的角色——从环境控制到操作规范，从细胞状态监测到风险预判，每一个细节都直接影响实验结果的可靠性今天，我想以2023年我们团队全程参与的一例“胃癌患者原代肿瘤细胞培养”案例为线索，和大家分享细胞培养护理工作的全流程与关键点病例介绍病例介绍2023年5月，我院肿瘤内科收治了一位58岁的胃癌患者王女士（化名）患者主诉“上腹痛伴体重下降3月”，胃镜检查提示胃窦部溃疡型肿物，病理活检确诊为低分化腺癌（Lauren分型弥漫型），临床分期cT4aN2M0（ⅢB期）患者既往体健，无糖尿病、高血压病史，ECOG评分1分，有手术意愿，但肿瘤位置靠近贲门，手术风险较高为制定个体化治疗方案，主管医生提出“原代肿瘤细胞培养+药物敏感性检测”需求需从患者手术切除的肿瘤组织中分离原代细胞，在体外模拟体内微环境进行培养，通过药敏实验筛选对患者肿瘤敏感的化疗药物，降低无效治疗风险病例介绍我们细胞培养护理团队于5月15日接到任务，当天患者行“腹腔镜下胃癌根治术”，术中取肿瘤组织约

1.5cm×

1.5cm×1cm，由手术护士用含双抗（青霉素100U/mL、链霉素100μg/mL）的DMEM培养基冰盒转运至实验室，交接时间为术后30分钟（符合原代细胞培养“组织离体后2小时内处理”的黄金时间要求）护理评估护理评估接到组织样本后，我们立即启动“细胞培养全流程评估”，从环境、设备、人员、样本状态四个维度展开环境评估细胞培养实验室为Ⅱ级生物安全实验室，分区明确（准备区-缓冲间-操作区-培养区）操作前2小时开启紫外灯消毒（30W紫外灯，距离操作台面

1.5米，照射60分钟），操作前30分钟开启超净台风机，检测超净台沉降菌（90mm平皿暴露30分钟，菌落数＜5CFU/皿）、空气尘埃粒子（≥

0.5μm粒子数＜352000个/m³），均符合《医药工业洁净室（区）悬浮粒子的测试方法》（GB/T16292-2010）要求；CO2培养箱温度37±

0.5℃，CO2浓度5±

0.2%，湿度＞90%，各项参数均校准合格设备与耗材评估检查培养箱报警系统（温度、CO2浓度异常时可声光报警）、倒置显微镜（物镜4×、10×、20×清晰，相差功能正常）、离心机（转速300g校准合格）、移液器（10μL、100μL、1000μL量程误差＜2%）；培养基（高糖DMEM+10%胎牛血清+1%双抗）为当日新配，pH值

7.2-

7.4（酚红指示剂呈亮红色），无浑浊或沉淀；消化液（

0.25%胰酶-

0.02%EDTA）为4℃保存，开封后未超过7天人员评估参与操作的3名护理人员均持有“细胞培养操作资格证”，近3个月操作考核均为“优秀”；操作前均更换灭菌实验服、戴无粉乳胶手套（经75%酒精喷洒消毒），手部细菌培养（接触平皿法）结果阴性；实习护士小李作为观察者，已完成“细胞培养基础操作”培训，当日由我（带教老师）全程监督样本状态评估肿瘤组织呈灰白色，质脆，表面可见少量血性渗出（符合低分化腺癌特征）；组织块大小约

1.2cm×

1.0cm×

0.8cm（运输过程中无挤压），放入含双抗培养基的离心管中，液体澄清无浑浊（提示无明显污染）；组织离体时间40分钟（在2小时黄金期内），温度4-8℃（冰盒保存有效）护理诊断护理诊断基于评估结果，结合细胞培养的常见风险点，我们提出以下护理诊断

1.潜在的细胞污染风险与组织样本携带内源性微生物、操作过程中无菌屏障破坏有关依据肿瘤组织可能携带口腔/胃肠道定植菌（如链球菌、肠球菌）；超净台操作时，若手臂频繁进出、物品摆放杂乱，可能导致气流紊乱，增加污染概率

2.细胞活性降低的风险与组织消化不充分或过度消化、培养基成分不稳定有关依据低分化肿瘤细胞间质少、细胞间连接松散，胰酶消化时间过长（＞15分钟）易导致细胞破裂；胎牛血清批次差异可能影响细胞增殖（本次使用的FBS为新批次，需观察细胞贴壁情况）护理诊断

3.实验时效性不足的风险与原代细胞培养周期长、传代难度大有关依据胃癌原代细胞培养平均贴壁时间为48-72小时，部分低分化细胞可能延迟至96小时；若首次传代（P1代）细胞密度不足80%，可能需延长培养时间，影响药敏实验进度护理目标与措施护理目标与措施针对上述诊断，我们制定了“分阶段、动态调整”的护理目标与措施，贯穿“组织处理-原代培养-传代扩增”全周期目标172小时内确认细胞无污染，培养环境持续达标措施组织处理阶段将肿瘤组织置于含2×双抗（青霉素200U/mL、链霉素200μg/mL）的PBS中漂洗3次（每次5分钟），去除表面血迹及可能的污染物；使用灭菌眼科剪将组织剪至1mm³碎块，加入

0.1%胶原酶Ⅳ（37℃振荡消化60分钟），期间每15分钟轻摇离心管（避免消化过度）护理目标与措施原代培养阶段消化后的细胞悬液经200目细胞筛过滤，1000rpm离心5分钟，弃上清后用完全培养基重悬，接种于包被鼠尾胶原的6孔板（每孔2mL培养基，细胞密度1×10⁶/mL）；每日观察2次（上午9点、下午4点），记录培养液颜色（正常为亮红色，变黄提示酸性代谢产物堆积）、浑浊度（浑浊提示污染）及细胞贴壁情况（倒置显微镜下观察是否有梭形/多边形细胞贴附于板底）环境监控每2小时记录培养箱温湿度、CO2浓度（使用电子温湿度计+CO2检测仪），超净台操作时保持手臂与开口的距离＞15cm，物品按“清洁区-操作区-污染区”单侧摆放，避免交叉目标2P1代细胞活性＞85%，增殖曲线符合胃癌原代细胞特征措施护理目标与措施培养基优化前3天使用“促贴壁培养基”（DMEM+20%FBS+1%非必需氨基酸+2ng/mL EGF），促进细胞贴壁；贴壁后（约72小时）更换为“维持培养基”（DMEM+10%FBS+1%双抗），降低血清浓度减少背景干扰消化控制首次传代时，待细胞融合度达70%-80%（约培养第7天），弃旧培养基，PBS漂洗2次（去除血清残留影响胰酶活性），加入

0.25%胰酶-EDTA（2mL/孔），37℃孵育3-5分钟（镜下观察细胞收缩变圆、间隙增大时终止），立即加入含10%FBS的培养基中和胰酶（血清中的α-抗胰蛋白酶可抑制胰酶活性）活性检测传代后取10μL细胞悬液与10μL台盼蓝染液混合，计数活细胞（未染色）比例，要求＞85%；同时绘制生长曲线（连续7天每日计数细胞密度），正常胃癌原代细胞应呈“延迟期（1-2天）-对数生长期（3-6天）-平台期（7天后）”趋势护理目标与措施目标3P2代细胞于培养第14天前达到药敏实验所需量（5×10⁵/孔×6孔板×3复孔）措施传代策略P1代细胞按1:2比例传代（胃癌原代细胞增殖较慢，过高比例可能导致密度不足），接种于T25培养瓶（每瓶5mL培养基）；传代后第3天首次换液（去除死细胞及代谢废物），之后每2-3天换液1次（根据培养基颜色调整，变黄则提前换液）进度监控建立“细胞培养日志”，记录每日换液时间、细胞融合度、形态变化（如是否出现空泡、脱壁）；若第10天融合度＜60%，则检查培养基pH（可能因CO2浓度波动导致）、血清批次（必要时更换为之前验证过的批次），或增加EGF浓度至5ng/mL（促进增殖）并发症的观察及护理并发症的观察及护理在本次培养中，我们重点关注了3类“并发症”（即细胞培养异常事件），并制定了针对性应对方案细菌污染（最常见并发症）观察要点培养液在24小时内由红变黄（酸性增强），并出现浑浊（肉眼可见絮状物）；镜下可见大量杆状或球状微生物，细胞变圆、脱壁死亡护理措施立即标记污染孔板，用75%酒精喷洒后密封于防漏袋中，按医疗废物处理；检查污染来源（如组织漂洗不彻底、操作时开口暴露时间过长），更换培养基、胰酶等耗材（必要时做细菌培养确认污染源）；对超净台进行深度消毒（先用3%过氧化氢擦拭，再紫外照射2小时），操作人员重新进行手卫生及无菌操作培训细胞老化（原代细胞特有问题）观察要点细胞形态变扁、增大，胞质内出现空泡或颗粒；增殖速度减慢（倍增时间＞48小时），传代后贴壁时间延长（＞24小时）护理措施减少传代次数（原代细胞建议使用P2-P3代，避免P4代后老化）；更换新鲜培养基（避免使用存放超过3天的培养基，因营养成分降解）；若老化严重，可尝试添加生长因子（如FGF-210ng/mL）或降低培养温度（36℃）减缓代谢；必要时复苏冻存的早期代次细胞（本次我们在P1代冻存了1管细胞，备用）支原体污染（隐性威胁）观察要点无明显培养液浑浊，但细胞增殖缓慢、形态异常（变细变长）；PCR检测支原体DNA阳性（本次实验每5天进行1次支原体检测）护理措施一旦确认污染，所有相关细胞、培养基、耗材均需销毁；实验室用支原体清除剂（如M-Plasmocin）处理培养箱、超净台表面；后续操作中使用支原体检测合格的胎牛血清（本次使用的FBS经厂家检测无支原体），并定期对实验室环境进行支原体监测（每月1次）健康教育健康教育本次案例中，我们不仅完成了细胞培养任务，更通过“案例带教”模式，对实习护士、新入职实验员进行了系统的健康教育，重点内容包括无菌操作的“红线意识”强调“每一次开口都是风险”超净台操作时，所有物品需经75%酒精擦拭后再放入；操作过程中避免谈话、咳嗽（减少气溶胶污染）；培养瓶/板开口后需倾斜45，避免正面对准操作者口鼻；使用后的枪头、吸管需立即放入污染缸，不得随意摆放细胞状态的“动态观察法”教会学员“看、记、比”三步法“看”——每日用倒置显微镜观察细胞形态（贴壁细胞是否伸展、悬浮细胞是否成团）、密度（融合度）、培养液颜色；“记”——记录在《细胞培养日志》中，包括换液时间、传代比例、异常现象；“比”——对比前1天的状态（如融合度是否增加10%-20%），若出现“停滞”或“倒退”，立即排查原因（如培养基是否漏加血清、培养箱门是否未关紧导致CO2泄漏）“以细胞为中心”的护理思维告诉学员“细胞不会说话，但会用形态和生长速度‘投诉’”比如，细胞边缘模糊、胞质颗粒增多，可能是消化过度；细胞成团不贴壁，可能是培养基中血清浓度不足；培养液迅速变黄，可能是细胞增殖旺盛（好事）或污染（坏事），需结合镜检判断这种“共情式”观察，能帮助护理人员更敏锐地捕捉细胞的“需求”总结总结回顾这次胃癌原代细胞培养的全程护理，我最深的感受是细胞培养护理不是“按步骤操作”的机械劳动，而是“以生命为本”的精细管理从组织样本接收到细胞成功用于药敏实验，我们经历了3次换液、2次传代、12次环境监测、7次细胞形态记录，最终在第12天获得了P2代活性92%的胃癌细胞，顺利完成药敏实验（结果显示患者对奥沙利铂+替吉奥敏感，临床调整方案后，患者术后3个月复查肿瘤标志物CA19-9下降80%）这次案例也让我更深刻地认识到护理工作在细胞实验中的核心价值我们不仅是“操作者”，更是“质量控制者”和“风险预判者”一个看似微小的操作失误（如超净台紫外消毒时间不足5分钟），可能导致整个实验失败；而一次及时的观察（如发现培养液轻微浑浊），可能挽救一批珍贵的原代细胞总结未来，随着再生医学、CAR-T细胞治疗等技术的发展，细胞培养的需求会越来越多、要求越来越高作为细胞培养护理人员，我们需要不断提升“三心”——细心（关注每个操作细节）、耐心（接受原代细胞的“慢生长”特性）、责任心（将细胞视为“患者”般守护）我相信，每一个认真对待细胞的护理人员，都在为医学进步添砖加瓦最后，想用带教时常说的一句话与大家共勉“你怎样对待细胞，细胞就会怎样回报实验——而实验的结果，终将回报给患者”这，就是我们工作的意义谢谢。